中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
1期
19-23
,共5页
杨芸%潘志明%马全刚%张磊%康喜龙%耿士忠%焦新安
楊蕓%潘誌明%馬全剛%張磊%康喜龍%耿士忠%焦新安
양예%반지명%마전강%장뢰%강희룡%경사충%초신안
鞭毛蛋白%血凝素%原核表达%疫苗
鞭毛蛋白%血凝素%原覈錶達%疫苗
편모단백%혈응소%원핵표체%역묘
目的 研发基于鞭毛蛋白的新型甲型H1N1流感疫苗.方法 分别以鼠伤寒沙门菌SL7202基因组和含有甲型H1N1流感病毒HA基因的重组质粒pET-HA为模板,通过PCR扩增Ⅱ相鞭毛蛋白fljB和HA1-2基因,再通过overlap PCR将这两基因片段拼接成HA1-2-fljB,将其插入原核表达质粒pET30a(+),构建重组质粒pET-HA1-2-fljB,并转化表达宿主菌E.coli BL21 (DE3)中,以IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白HA1-2-fljB的表达.结果正确构建出重组质粒pET-HA1-2-fljB,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,融合蛋白分子量约84 kD,并具有良好的免疫反应性,能强烈诱导HEK293-mTLR5细胞分泌IL-8.结论 成功表达具有TLR5生物学活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究甲型H1N1流感疫苗奠定了基础.
目的 研髮基于鞭毛蛋白的新型甲型H1N1流感疫苗.方法 分彆以鼠傷寒沙門菌SL7202基因組和含有甲型H1N1流感病毒HA基因的重組質粒pET-HA為模闆,通過PCR擴增Ⅱ相鞭毛蛋白fljB和HA1-2基因,再通過overlap PCR將這兩基因片段拼接成HA1-2-fljB,將其插入原覈錶達質粒pET30a(+),構建重組質粒pET-HA1-2-fljB,併轉化錶達宿主菌E.coli BL21 (DE3)中,以IPTG誘導錶達.SDS-PAGE和Western blotting鑒定融閤蛋白HA1-2-fljB的錶達.結果正確構建齣重組質粒pET-HA1-2-fljB,SDS-PAGE和Western blotting結果顯示,融閤蛋白分子量約84 kD,併具有良好的免疫反應性,能彊烈誘導HEK293-mTLR5細胞分泌IL-8.結論 成功錶達具有TLR5生物學活性的融閤蛋白HA1-2-fljB,為研究甲型H1N1流感疫苗奠定瞭基礎.
목적 연발기우편모단백적신형갑형H1N1류감역묘.방법 분별이서상한사문균SL7202기인조화함유갑형H1N1류감병독HA기인적중조질립pET-HA위모판,통과PCR확증Ⅱ상편모단백fljB화HA1-2기인,재통과overlap PCR장저량기인편단병접성HA1-2-fljB,장기삽입원핵표체질립pET30a(+),구건중조질립pET-HA1-2-fljB,병전화표체숙주균E.coli BL21 (DE3)중,이IPTG유도표체.SDS-PAGE화Western blotting감정융합단백HA1-2-fljB적표체.결과정학구건출중조질립pET-HA1-2-fljB,SDS-PAGE화Western blotting결과현시,융합단백분자량약84 kD,병구유량호적면역반응성,능강렬유도HEK293-mTLR5세포분비IL-8.결론 성공표체구유TLR5생물학활성적융합단백HA1-2-fljB,위연구갑형H1N1류감역묘전정료기출.
