第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2003年
13期
1146-1148
,共3页
曹廷兵%叶治家%彭家和%巩燕%江渝
曹廷兵%葉治傢%彭傢和%鞏燕%江渝
조정병%협치가%팽가화%공연%강투
PPARγ%PPARγ-LBD%表达%纯化
PPARγ%PPARγ-LBD%錶達%純化
PPARγ%PPARγ-LBD%표체%순화
目的探索诱导PPARγ-LBD的最适表达条件,提高可溶性PPARγ-LBD蛋白在大肠杆菌中的表达量,然后用Ni2+-NTA离子交换树脂对表达蛋白进行分离纯化.方法 PPARγ-LBD在大肠杆菌BL21(DE3 )中进行诱导表达时,以不同IPTG浓度、不同温度(37 ℃,30 ℃,20 ℃),确定可溶性PPA Rγ-LBD蛋白表达的最适条件;然后用Ni2+-NTA离子交换树脂进行分离纯化,其产物进行SDS-PAGE纯度分析和Western blotting鉴定.结果建立了重组蛋白PPARγ-LBD的最适诱导条件,即0.5 mmol/L IPTG浓度,20 ℃诱导14 h其可溶性表达蛋白的量最高;纯化产物经SDS-PAGE纯度分析大于90%以上;Western blotting检测,纯化产物为PPARγ-LBD目的蛋白,其分子质量约34×103.结论重组蛋白P PARγ-LBD在E.coli中进行了成功表达和纯化,并且降低温度可提高可溶性蛋白PPARγ -LBD表达量达50%以上.
目的探索誘導PPARγ-LBD的最適錶達條件,提高可溶性PPARγ-LBD蛋白在大腸桿菌中的錶達量,然後用Ni2+-NTA離子交換樹脂對錶達蛋白進行分離純化.方法 PPARγ-LBD在大腸桿菌BL21(DE3 )中進行誘導錶達時,以不同IPTG濃度、不同溫度(37 ℃,30 ℃,20 ℃),確定可溶性PPA Rγ-LBD蛋白錶達的最適條件;然後用Ni2+-NTA離子交換樹脂進行分離純化,其產物進行SDS-PAGE純度分析和Western blotting鑒定.結果建立瞭重組蛋白PPARγ-LBD的最適誘導條件,即0.5 mmol/L IPTG濃度,20 ℃誘導14 h其可溶性錶達蛋白的量最高;純化產物經SDS-PAGE純度分析大于90%以上;Western blotting檢測,純化產物為PPARγ-LBD目的蛋白,其分子質量約34×103.結論重組蛋白P PARγ-LBD在E.coli中進行瞭成功錶達和純化,併且降低溫度可提高可溶性蛋白PPARγ -LBD錶達量達50%以上.
목적탐색유도PPARγ-LBD적최괄표체조건,제고가용성PPARγ-LBD단백재대장간균중적표체량,연후용Ni2+-NTA리자교환수지대표체단백진행분리순화.방법 PPARγ-LBD재대장간균BL21(DE3 )중진행유도표체시,이불동IPTG농도、불동온도(37 ℃,30 ℃,20 ℃),학정가용성PPA Rγ-LBD단백표체적최괄조건;연후용Ni2+-NTA리자교환수지진행분리순화,기산물진행SDS-PAGE순도분석화Western blotting감정.결과건립료중조단백PPARγ-LBD적최괄유도조건,즉0.5 mmol/L IPTG농도,20 ℃유도14 h기가용성표체단백적량최고;순화산물경SDS-PAGE순도분석대우90%이상;Western blotting검측,순화산물위PPARγ-LBD목적단백,기분자질량약34×103.결론중조단백P PARγ-LBD재E.coli중진행료성공표체화순화,병차강저온도가제고가용성단백PPARγ -LBD표체량체50%이상.
