南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
5期
731-735
,共5页
王明永%张雅妮%雷鸣%左大明%张丽芸%陈政良
王明永%張雅妮%雷鳴%左大明%張麗蕓%陳政良
왕명영%장아니%뢰명%좌대명%장려예%진정량
破伤风毒素C蛋白%基因克隆%重组表达%免疫原性%模式抗原
破傷風毒素C蛋白%基因剋隆%重組錶達%免疫原性%模式抗原
파상풍독소C단백%기인극륭%중조표체%면역원성%모식항원
目的 获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白.方法 以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2+NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA琼脂糖柱分离目的 蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的 蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性.结果 获得1373 bp的TrC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a(+)-TTC并在大肠杆菌中表达.TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22％,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5％的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1:25 600.结论 所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原.
目的 穫得高純度、高免疫原性的破傷風毒素C片段(TTC)蛋白.方法 以PCR從破傷風桿菌質粒DNA中擴增TTC基因片段,將其插入載體pET43.1a(+)併導入大腸桿菌BL21(DE3)plysS中錶達.用Ni2+NTA瓊脂糖柱純化融閤蛋白,經凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA瓊脂糖柱分離目的 蛋白.SDS-PAGE和免疫印跡分析目的 蛋白的相對分子質量和抗原性,動物免疫實驗鑒定其免疫原性.結果 穫得1373 bp的TrC基因片段,構建成重組錶達載體pET43.1a(+)-TTC併在大腸桿菌中錶達.TTC-Nus融閤蛋白的錶達量佔菌體總蛋白的22％,酶切後TTC蛋白可與載體蛋白有效分離,穫得純度為95.5％的TTC蛋白,該蛋白可被破傷風抗毒素識彆;將TTC蛋白免疫小鼠後,免疫血清可與破傷風毒素特異性結閤,三次免疫後其抗體效價可達1:25 600.結論 所穫TTC蛋白純度高,免疫原性好,為研究體內外抗原提呈、免疫應答提供瞭良好的模式抗原.
목적 획득고순도、고면역원성적파상풍독소C편단(TTC)단백.방법 이PCR종파상풍간균질립DNA중확증TTC기인편단,장기삽입재체pET43.1a(+)병도입대장간균BL21(DE3)plysS중표체.용Ni2+NTA경지당주순화융합단백,경응혈매매절,재용Ni2+-NTA경지당주분리목적 단백.SDS-PAGE화면역인적분석목적 단백적상대분자질량화항원성,동물면역실험감정기면역원성.결과 획득1373 bp적TrC기인편단,구건성중조표체재체pET43.1a(+)-TTC병재대장간균중표체.TTC-Nus융합단백적표체량점균체총단백적22％,매절후TTC단백가여재체단백유효분리,획득순도위95.5％적TTC단백,해단백가피파상풍항독소식별;장TTC단백면역소서후,면역혈청가여파상풍독소특이성결합,삼차면역후기항체효개가체1:25 600.결론 소획TTC단백순도고,면역원성호,위연구체내외항원제정、면역응답제공료량호적모식항원.
