结核分枝杆菌glcB基因原核表达质粒的构建、表达和纯化
결핵분지간균glcB기인원핵표체질립적구건、표체화순화
Construction and expression of the prokyaryotic expression plasmid of M. tb glcB gene and protein purification
  • 万方数据
    中国防痨杂志 중국방로잡지
    BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
    2009年 9期 526-529 ,共4页

    陈曦%贾红彦%古淑香%李自慧%刘忠泉%郑晓静%邢爱英%杜博平%张继增%张宗德

    진희%가홍언%고숙향%리자혜%류충천%정효정%형애영%두박평%장계증%장종덕

    分枝杆菌%结核%重组蛋白质类 分枝桿菌%結覈%重組蛋白質類
    분지간균%결핵%중조단백질류
    目的 构建结核分枝杆菌glcB基因原核表达工程株,并进行表达、纯化.方法 用PCR扩增结核分枝杆菌glcB基因,并克隆入pTA2质粒.测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):glcB重组体,转化宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3).结果 结核分枝杆菌glcB基因工程株经0.4 mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,表达出相对分子质量为92 kD重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量最高.表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量占全菌蛋白质的50%.经Ni-NTA柱纯化,获得纯度为90%的重组蛋白.结论 成功地构建了结核分枝杆菌glcB基因工程表达株,并获得GlcB重组蛋白,为研究新型血清学诊断活动性结核病奠定了基础.
    목적 구건결핵분지간균glcB기인원핵표체공정주,병진행표체、순화.방법 용PCR확증결핵분지간균glcB기인,병극륭입pTA2질립.측서정학후,재아극륭입pET30a(+)질립,구건pET30a(+):glcB중조체,전화숙주균대장애희균BL21(DE3).결과 결핵분지간균glcB기인공정주경0.4 mM이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도후,표체출상대분자질량위92 kD중조단백.SDS-PAGE분석현시,IPTG유도4 h중조단백적표체량최고.표체단백이포함체형식존재우포질중,표체량점전균단백질적50%.경Ni-NTA주순화,획득순도위90%적중조단백.결론 성공지구건료결핵분지간균glcB기인공정표체주,병획득GlcB중조단백,위연구신형혈청학진단활동성결핵병전정료기출.
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