厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2010年
3期
410-416
,共7页
王颖彬%程通%魏丽华%张涛%梁露萍%夏宁邵
王穎彬%程通%魏麗華%張濤%樑露萍%夏寧邵
왕영빈%정통%위려화%장도%량로평%하저소
CCR5%RNA干扰%人工miRNA
CCR5%RNA榦擾%人工miRNA
CCR5%RNA간우%인공miRNA
趋化因子CCR5是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,通过抑制CCR5的表达可以在一定程度上阻断HIV-1的复制进程.miRNA介导的RNA干扰相比经典的siRNA在应用中具有更多的特点.本研究的目的是构建可特异有效靶向CCR5的人工miRNA元件.本研究以CCR5基因序列为模板设计了14个miRNA靶序列,以天然miR-30a为基础骨架通过靶序列区替换构建人工miRNA元件.通过将miRNA表达质粒与携带靶序列区的报告质粒的共转染抑制实验检测不同miRNA的抑制效率,结果显示miCCR-13A具有较好的抑制效率和特异性.进一步将miCCR-13A表达载体转染CCR5阳性的HIV-1受体细胞株TZM-b1,RT-PCR检测显示miCCR-13A可在细胞中获得有效表达,同时应用免疫流式细胞术检测显示在miCCR-13A转染细胞相比对照细胞的CCR5蛋白的检测活性明显降低.进一步的研究显示miCCR-13A在细胞中不会影响细胞活性和干扰素效应相关基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特异性.本研究获得的可特异靶向CCR5的人工miRNA元件可为进一步的抗HIV-1研究提供重要基础.
趨化因子CCR5是HIV-1入侵機體細胞的主要輔助受體之一,通過抑製CCR5的錶達可以在一定程度上阻斷HIV-1的複製進程.miRNA介導的RNA榦擾相比經典的siRNA在應用中具有更多的特點.本研究的目的是構建可特異有效靶嚮CCR5的人工miRNA元件.本研究以CCR5基因序列為模闆設計瞭14箇miRNA靶序列,以天然miR-30a為基礎骨架通過靶序列區替換構建人工miRNA元件.通過將miRNA錶達質粒與攜帶靶序列區的報告質粒的共轉染抑製實驗檢測不同miRNA的抑製效率,結果顯示miCCR-13A具有較好的抑製效率和特異性.進一步將miCCR-13A錶達載體轉染CCR5暘性的HIV-1受體細胞株TZM-b1,RT-PCR檢測顯示miCCR-13A可在細胞中穫得有效錶達,同時應用免疫流式細胞術檢測顯示在miCCR-13A轉染細胞相比對照細胞的CCR5蛋白的檢測活性明顯降低.進一步的研究顯示miCCR-13A在細胞中不會影響細胞活性和榦擾素效應相關基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特異性.本研究穫得的可特異靶嚮CCR5的人工miRNA元件可為進一步的抗HIV-1研究提供重要基礎.
추화인자CCR5시HIV-1입침궤체세포적주요보조수체지일,통과억제CCR5적표체가이재일정정도상조단HIV-1적복제진정.miRNA개도적RNA간우상비경전적siRNA재응용중구유경다적특점.본연구적목적시구건가특이유효파향CCR5적인공miRNA원건.본연구이CCR5기인서렬위모판설계료14개miRNA파서렬,이천연miR-30a위기출골가통과파서렬구체환구건인공miRNA원건.통과장miRNA표체질립여휴대파서렬구적보고질립적공전염억제실험검측불동miRNA적억제효솔,결과현시miCCR-13A구유교호적억제효솔화특이성.진일보장miCCR-13A표체재체전염CCR5양성적HIV-1수체세포주TZM-b1,RT-PCR검측현시miCCR-13A가재세포중획득유효표체,동시응용면역류식세포술검측현시재miCCR-13A전염세포상비대조세포적CCR5단백적검측활성명현강저.진일보적연구현시miCCR-13A재세포중불회영향세포활성화간우소효응상관기인osa1화stat1 mRNA수평,구유량호적특이성.본연구획득적가특이파향CCR5적인공miRNA원건가위진일보적항HIV-1연구제공중요기출.
