生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
23-25
,共3页
居相春%王海烽%吴婕%黄海%文铁桥
居相春%王海烽%吳婕%黃海%文鐵橋
거상춘%왕해봉%오첩%황해%문철교
树突状细胞因子1%DCF1%原核表达%蛋白纯化
樹突狀細胞因子1%DCF1%原覈錶達%蛋白純化
수돌상세포인자1%DCF1%원핵표체%단백순화
目的:克隆小鼠重组树突状细胞因子DCF1蛋白进行原核表达、纯化与鉴定.方法:采用PCR从小鼠脑cDNA克隆dcf1基因,构建DCF1原核表达重组质粒(pET30a-DCF1)并转化E.coli的BL21(DE3)菌株.IPTG诱导重组蛋白表达,并在变性条件下经Ni sepharose FF6亲和层析柱纯化,再通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定.结果:成功克隆到大小为972bp的小鼠源dcf1基因片段并准确插入表达载体pET30a,0.1 mmol/L IPTG诱导转化菌2h可表达大量的DCF1蛋白,并可经Ni Sepharose FF6柱亲和层析得到高度纯化.结论:成功获得纯化的42kDa重组小鼠DCF1蛋白,为后续进行DCF1蛋白功能研究奠定了基础.
目的:剋隆小鼠重組樹突狀細胞因子DCF1蛋白進行原覈錶達、純化與鑒定.方法:採用PCR從小鼠腦cDNA剋隆dcf1基因,構建DCF1原覈錶達重組質粒(pET30a-DCF1)併轉化E.coli的BL21(DE3)菌株.IPTG誘導重組蛋白錶達,併在變性條件下經Ni sepharose FF6親和層析柱純化,再通過SDS-PAGE和Western blotting鑒定.結果:成功剋隆到大小為972bp的小鼠源dcf1基因片段併準確插入錶達載體pET30a,0.1 mmol/L IPTG誘導轉化菌2h可錶達大量的DCF1蛋白,併可經Ni Sepharose FF6柱親和層析得到高度純化.結論:成功穫得純化的42kDa重組小鼠DCF1蛋白,為後續進行DCF1蛋白功能研究奠定瞭基礎.
목적:극륭소서중조수돌상세포인자DCF1단백진행원핵표체、순화여감정.방법:채용PCR종소서뇌cDNA극륭dcf1기인,구건DCF1원핵표체중조질립(pET30a-DCF1)병전화E.coli적BL21(DE3)균주.IPTG유도중조단백표체,병재변성조건하경Ni sepharose FF6친화층석주순화,재통과SDS-PAGE화Western blotting감정.결과:성공극륭도대소위972bp적소서원dcf1기인편단병준학삽입표체재체pET30a,0.1 mmol/L IPTG유도전화균2h가표체대량적DCF1단백,병가경Ni Sepharose FF6주친화층석득도고도순화.결론:성공획득순화적42kDa중조소서DCF1단백,위후속진행DCF1단백공능연구전정료기출.
