CAJ | 학술논문

目的:探讨人源性长寿保障基因(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)对人肝癌HCCLM3细胞体外转移的影响及可能的作用机制.方法:构建含人LASS2基因的重组腺病毒并转染入HCCLM3细胞；采用蛋白质印迹法检测HCCLM3细胞中LASS2蛋白的表达水平；划痕实验及体外侵袭实验检测LASS2基因过表达对HCCLM3细胞在迁移和侵袭等转移能力上的改变；免疫共沉淀法验证LASS2蛋白与V-ATPase(vacuolar H+-ATPase)质子泵中的c亚基(ATP6L)在细胞内相互结合的情况；通过对细胞内外H+浓度的测定,探讨LASS2过表达对V-ATPase功能抑制的情况.结果:成功构建了含人LASS2基因的重组腺病毒,LASS2基因在HCCLM3细胞中能有效表达；LASS2过表达可使HCCLM3细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P＜0.01),其中侵袭能力下降达(48.3±7.6)％,穿过划痕的细胞个数从对照组的(59.00±6.87)个下降至(10.83±3.75)个；LASS2蛋白与ATP6L蛋白在HCCLM3细胞内特异性结合；LASS2过表达后,细胞内外H+浓度发生明显变化,表明V-ATPase质子泵功能受到抑制.结论:LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L,抑制其分泌H+功能相关.
목적:탐토인원성장수보장기인(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)대인간암HCCLM3세포체외전이적영향급가능적작용궤제.방법:구건함인LASS2기인적중조선병독병전염입HCCLM3세포；채용단백질인적법검측HCCLM3세포중LASS2단백적표체수평；화흔실험급체외침습실험검측LASS2기인과표체대HCCLM3세포재천이화침습등전이능력상적개변；면역공침정법험증LASS2단백여V-ATPase(vacuolar H+-ATPase)질자빙중적c아기(ATP6L)재세포내상호결합적정황；통과대세포내외H+농도적측정,탐토LASS2과표체대V-ATPase공능억제적정황.결과:성공구건료함인LASS2기인적중조선병독,LASS2기인재HCCLM3세포중능유효표체；LASS2과표체가사HCCLM3세포적침습화천이능력균명현하강(P＜0.01),기중침습능력하강체(48.3±7.6)％,천과화흔적세포개수종대조조적(59.00±6.87)개하강지(10.83±3.75)개；LASS2단백여ATP6L단백재HCCLM3세포내특이성결합；LASS2과표체후,세포내외H+농도발생명현변화,표명V-ATPase질자빙공능수도억제.결론:LASS2기인재HCCLM3세포중과표체가억제간암세포적천이화침습능력,기궤제가능여LASS2단백결합ATP6L,억제기분비H+공능상관.