军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2004年
4期
314-318
,共5页
李凌凌%张部昌%张华%任洌%刘传暄%马清钧
李凌凌%張部昌%張華%任洌%劉傳暄%馬清鈞
리릉릉%장부창%장화%임렬%류전훤%마청균
糖多孢红霉菌%聚酮合成酶%同源重组%酮内酯类%3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B
糖多孢紅黴菌%聚酮閤成酶%同源重組%酮內酯類%3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B
당다포홍매균%취동합성매%동원중조%동내지류%3-탈양-3-탄기-홍매내지B
目的:构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体,探讨SRR氨基酸相应9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的关系.方法:以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应9核苷酸的KR6酶域DNA片段,并克隆到载体pWHM3上,构建了同源重组质粒pWHM3-SRR.将pWHM3-SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株,筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3-A、B和C.λC3-A在无硫链丝菌肽(Thio)的R3M斜面上生长两代后,制备的原生质体涂R3M平皿,挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3-SRR.结果:部分基因组DNA序列分析表明,糖多孢红霉菌λC3-SRR染色体上SRR氨基酸相应9核苷酸已经敲除,Zabspec Fab质谱分析证实λC3-SRR菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B.结论:糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应9核苷酸敲除的λC3-SRR突变菌株可以合成3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,SRR为KR6酶域上NADPH 2′-磷酸结合位点.
目的:構建糖多孢紅黴菌KR6酶域基因失活突變體,探討SRR氨基痠相應9覈苷痠去除突變體與閤成酮內酯類化閤物3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B的關繫.方法:以糖多孢紅黴菌基因組DNA為模闆,用重疊PCR技術擴增齣缺少SRR氨基痠相應9覈苷痠的KR6酶域DNA片段,併剋隆到載體pWHM3上,構建瞭同源重組質粒pWHM3-SRR.將pWHM3-SRR質粒轉化糖多孢紅黴菌λC3菌株,篩選齣質粒整閤到染色體上紅黴素閤成基因位點的整閤體λC3-A、B和C.λC3-A在無硫鏈絲菌肽(Thio)的R3M斜麵上生長兩代後,製備的原生質體塗R3M平皿,挑選齣不能在含Thio的R3M斜麵上生長、髮酵液也無抑製枯草芽孢桿菌活性的突變菌株λC3-SRR.結果:部分基因組DNA序列分析錶明,糖多孢紅黴菌λC3-SRR染色體上SRR氨基痠相應9覈苷痠已經敲除,Zabspec Fab質譜分析證實λC3-SRR菌株閤成瞭3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B.結論:糖多孢紅黴菌KR6酶域SRR氨基痠相應9覈苷痠敲除的λC3-SRR突變菌株可以閤成3-脫氧-3-羰基-紅黴內酯B,SRR為KR6酶域上NADPH 2′-燐痠結閤位點.
목적:구건당다포홍매균KR6매역기인실활돌변체,탐토SRR안기산상응9핵감산거제돌변체여합성동내지류화합물3-탈양-3-탄기-홍매내지B적관계.방법:이당다포홍매균기인조DNA위모판,용중첩PCR기술확증출결소SRR안기산상응9핵감산적KR6매역DNA편단,병극륭도재체pWHM3상,구건료동원중조질립pWHM3-SRR.장pWHM3-SRR질립전화당다포홍매균λC3균주,사선출질립정합도염색체상홍매소합성기인위점적정합체λC3-A、B화C.λC3-A재무류련사균태(Thio)적R3M사면상생장량대후,제비적원생질체도R3M평명,도선출불능재함Thio적R3M사면상생장、발효액야무억제고초아포간균활성적돌변균주λC3-SRR.결과:부분기인조DNA서렬분석표명,당다포홍매균λC3-SRR염색체상SRR안기산상응9핵감산이경고제,Zabspec Fab질보분석증실λC3-SRR균주합성료3-탈양-3-탄기-홍매내지B.결론:당다포홍매균KR6매역SRR안기산상응9핵감산고제적λC3-SRR돌변균주가이합성3-탈양-3-탄기-홍매내지B,SRR위KR6매역상NADPH 2′-린산결합위점.
