科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2005年
6期
540-545
,共6页
陈三凤%管乐%涂然%孙文改%李季伦
陳三鳳%管樂%塗然%孫文改%李季倫
진삼봉%관악%도연%손문개%리계륜
巴西固氮螺菌%酵母双杂合系统%PAS结构域%NifA蛋白
巴西固氮螺菌%酵母雙雜閤繫統%PAS結構域%NifA蛋白
파서고담라균%효모쌍잡합계통%PAS결구역%NifA단백
利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将nifA基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-nifA, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-nifA为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1～1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的fhuE基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.
利用酵母雙雜閤繫統從巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中篩選與NifA有直接相互作用的蛋白質因子. 首先將nifA基因剋隆到pGBD-C2載體上, 構建成誘餌質粒pGBD-nifA, 接著將巴西固氮螺菌的染色體DNA構建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3質粒載體上, 形成3箇質粒文庫YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然後以pGBD-nifA為誘餌, 對YSPC1, YSPC2和YSPC3這3箇文庫進行瞭篩選, 得到11箇暘性剋隆. DNA序列分析錶明, 這11箇暘性剋隆分為4類, 包含4箇1～1.3 kb不同的基因片段. 對這4箇基因片段進行同源性比較髮現, 其中2箇編碼的蛋白質含有與信號傳遞有關的PAS結構域, 另外1箇基因片段含有與吸收鐵有關的fhuE基因, 另一箇是未知蛋白. 將這4箇基因片段從原來的pGAD載體轉移到pGBD載體, 即互換換載體後, 它們仍然與NifA有相互作用; 對這4箇基因片段進行移碼突變則不再與NifA有相互作用, 說明瞭它們與NifA相互作用的特異性.
이용효모쌍잡합계통종파서고담라균(Azospirillum brasilense)Sp중사선여NifA유직접상호작용적단백질인자. 수선장nifA기인극륭도pGBD-C2재체상, 구건성유이질립pGBD-nifA, 접착장파서고담라균적염색체DNA구건재pGAD-C1, pGAD-C2화pGAD-C3질립재체상, 형성3개질립문고YSPC1, YSPC2화YSPC3. 연후이pGBD-nifA위유이, 대YSPC1, YSPC2화YSPC3저3개문고진행료사선, 득도11개양성극륭. DNA서렬분석표명, 저11개양성극륭분위4류, 포함4개1～1.3 kb불동적기인편단. 대저4개기인편단진행동원성비교발현, 기중2개편마적단백질함유여신호전체유관적PAS결구역, 령외1개기인편단함유여흡수철유관적fhuE기인, 령일개시미지단백. 장저4개기인편단종원래적pGAD재체전이도pGBD재체, 즉호환환재체후, 타문잉연여NifA유상호작용; 대저4개기인편단진행이마돌변칙불재여NifA유상호작용, 설명료타문여NifA상호작용적특이성.
