农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
439-445
,共7页
毛白杨%叶绿体基因%启动子%终止子%原核表达
毛白楊%葉綠體基因%啟動子%終止子%原覈錶達
모백양%협록체기인%계동자%종지자%원핵표체
从毛白杨(Populus tomentosa)组培苗中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆了包含psbA基因启动子、终止子和16S rRNA基因启动子的叶绿体DNA序列,并在此基础上克隆了启动子Prrn、PpsbA及终止子TpsbA.与烟草(Nicotiana tabacum)叶绿体基因组相关同源序列比较结果表明,这两种启动子中,起重要作用的调控序列元件,如-35区、-10区以及翻译调控序列等是高度保守的.利用叶绿体基因启动子的原核表达特性,用启动子Prrn(其后添加rbcL基因的RBS序列及突变的RBSm序列)和PpsbA及终止子TpsbA分别构建了GFP基因的原核表达载体pSGmT、pSmGmT和pPGmT,并以T7启动子为对照(载体pETGm),以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为宿主菌进行了初步的原核表达实验.检测结果表明,克隆到的叶绿体基因启动子PpsbA与Prrn具有生物学功能,其转录活性主要受大肠杆菌BL21本身的RNA聚合酶的调控,所控制的GFP是组成型表达的;T7RNA聚合酶对其有一定的作用,但比对T7启动子的作用弱.核糖体结合位点(RBS序列)的改变能够极大地影响目的基因的表达,说明RBS序列在基因表达翻译中有重要作用.
從毛白楊(Populus tomentosa)組培苗中提取基因組總DNA,用PCR方法剋隆瞭包含psbA基因啟動子、終止子和16S rRNA基因啟動子的葉綠體DNA序列,併在此基礎上剋隆瞭啟動子Prrn、PpsbA及終止子TpsbA.與煙草(Nicotiana tabacum)葉綠體基因組相關同源序列比較結果錶明,這兩種啟動子中,起重要作用的調控序列元件,如-35區、-10區以及翻譯調控序列等是高度保守的.利用葉綠體基因啟動子的原覈錶達特性,用啟動子Prrn(其後添加rbcL基因的RBS序列及突變的RBSm序列)和PpsbA及終止子TpsbA分彆構建瞭GFP基因的原覈錶達載體pSGmT、pSmGmT和pPGmT,併以T7啟動子為對照(載體pETGm),以大腸桿菌(Escherichia coli)BL21為宿主菌進行瞭初步的原覈錶達實驗.檢測結果錶明,剋隆到的葉綠體基因啟動子PpsbA與Prrn具有生物學功能,其轉錄活性主要受大腸桿菌BL21本身的RNA聚閤酶的調控,所控製的GFP是組成型錶達的;T7RNA聚閤酶對其有一定的作用,但比對T7啟動子的作用弱.覈糖體結閤位點(RBS序列)的改變能夠極大地影響目的基因的錶達,說明RBS序列在基因錶達翻譯中有重要作用.
종모백양(Populus tomentosa)조배묘중제취기인조총DNA,용PCR방법극륭료포함psbA기인계동자、종지자화16S rRNA기인계동자적협록체DNA서렬,병재차기출상극륭료계동자Prrn、PpsbA급종지자TpsbA.여연초(Nicotiana tabacum)협록체기인조상관동원서렬비교결과표명,저량충계동자중,기중요작용적조공서렬원건,여-35구、-10구이급번역조공서렬등시고도보수적.이용협록체기인계동자적원핵표체특성,용계동자Prrn(기후첨가rbcL기인적RBS서렬급돌변적RBSm서렬)화PpsbA급종지자TpsbA분별구건료GFP기인적원핵표체재체pSGmT、pSmGmT화pPGmT,병이T7계동자위대조(재체pETGm),이대장간균(Escherichia coli)BL21위숙주균진행료초보적원핵표체실험.검측결과표명,극륭도적협록체기인계동자PpsbA여Prrn구유생물학공능,기전록활성주요수대장간균BL21본신적RNA취합매적조공,소공제적GFP시조성형표체적;T7RNA취합매대기유일정적작용,단비대T7계동자적작용약.핵당체결합위점(RBS서렬)적개변능구겁대지영향목적기인적표체,설명RBS서렬재기인표체번역중유중요작용.
