畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
5期
725-729
,共5页
谭兵%王红宁%张毅%张安云%樊汶樵
譚兵%王紅寧%張毅%張安雲%樊汶樵
담병%왕홍저%장의%장안운%번문초
鸡%粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子%原核表达%生物学活性
鷄%粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子%原覈錶達%生物學活性
계%립세포-거서세포집락자격인자%원핵표체%생물학활성
通过PCR方法扩增不含信号肽的鸡GM-CSF成熟蛋白基因,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒p32GM-CSF,通过IPTG诱导重组鸡GM-CSF蛋白表达,经镍离子亲和层析纯化后,用MTT法检测表达重组蛋白的生物学活性,并制备免抗鸡GM-CSF多克隆抗体.结果表明成功地构建了 p32GM-CSF原核表达质粒,SDS-PAGE结果显示表达的重组蛋白约34 ku,主要以包涵体形式表达,纯化后得到高纯度日的蛋白.Western Blot结果表明,该重组蛋白能与制备的抗鸡GM-CSF抗体特异性结合.MTT试验证实,该重组蛋白具有明显增强鸡骨髓细胞增殖的生物学活性;这些研究结果表明.表达的重组ehGM-CSF蛋白及其多克隆抗体拥有相应的生物学功能,这将为进一步研究鸡GM-CSF蛋白的生物学功能及其应用奠定基础.
通過PCR方法擴增不含信號肽的鷄GM-CSF成熟蛋白基因,剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+),構建原覈錶達質粒p32GM-CSF,通過IPTG誘導重組鷄GM-CSF蛋白錶達,經鎳離子親和層析純化後,用MTT法檢測錶達重組蛋白的生物學活性,併製備免抗鷄GM-CSF多剋隆抗體.結果錶明成功地構建瞭 p32GM-CSF原覈錶達質粒,SDS-PAGE結果顯示錶達的重組蛋白約34 ku,主要以包涵體形式錶達,純化後得到高純度日的蛋白.Western Blot結果錶明,該重組蛋白能與製備的抗鷄GM-CSF抗體特異性結閤.MTT試驗證實,該重組蛋白具有明顯增彊鷄骨髓細胞增殖的生物學活性;這些研究結果錶明.錶達的重組ehGM-CSF蛋白及其多剋隆抗體擁有相應的生物學功能,這將為進一步研究鷄GM-CSF蛋白的生物學功能及其應用奠定基礎.
통과PCR방법확증불함신호태적계GM-CSF성숙단백기인,극륭지원핵표체재체pET-32a(+),구건원핵표체질립p32GM-CSF,통과IPTG유도중조계GM-CSF단백표체,경얼리자친화층석순화후,용MTT법검측표체중조단백적생물학활성,병제비면항계GM-CSF다극륭항체.결과표명성공지구건료 p32GM-CSF원핵표체질립,SDS-PAGE결과현시표체적중조단백약34 ku,주요이포함체형식표체,순화후득도고순도일적단백.Western Blot결과표명,해중조단백능여제비적항계GM-CSF항체특이성결합.MTT시험증실,해중조단백구유명현증강계골수세포증식적생물학활성;저사연구결과표명.표체적중조ehGM-CSF단백급기다극륭항체옹유상응적생물학공능,저장위진일보연구계GM-CSF단백적생물학공능급기응용전정기출.
