安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
29期
16134-16137
,共4页
吴勇延%肖亮%单黎然%宋振%郭泽坤
吳勇延%肖亮%單黎然%宋振%郭澤坤
오용연%초량%단려연%송진%곽택곤
SUMO1%RNA干涉%双启动子载体
SUMO1%RNA榦涉%雙啟動子載體
SUMO1%RNA간섭%쌍계동자재체
[目的]构建人SUMO1的真核表达载体,筛选SUMO1的有效干涉靶点.[方法]将SUMO1亚克隆至载体pCMV-HA中.寻找可能的干涉位点,合成上下游引物,退火后直接克隆入GFP-HU双启动子载体.用Western Blot和细胞荧光的方法检测各载体对外源性SUMO融合蛋白表达的影响,其后检测对内源性SUMO1表达的敲降效果.[结果]构建的人SUMO1真核表达载体pCMV-HA-SUMO1测序正确.针对267、279、293、309、342、386等不同干涉靶点构建双启动子干扰载体,其中293位点的干涉载体在Western Blot和荧光检测试验中均表现出稳定的敲降效果,抑制了SUMO1的表达.[结论]该研究成功构建了SUMO1的真核表达载体及具有明显敲降效果的干涉载体,可为后续研究奠定基础.
[目的]構建人SUMO1的真覈錶達載體,篩選SUMO1的有效榦涉靶點.[方法]將SUMO1亞剋隆至載體pCMV-HA中.尋找可能的榦涉位點,閤成上下遊引物,退火後直接剋隆入GFP-HU雙啟動子載體.用Western Blot和細胞熒光的方法檢測各載體對外源性SUMO融閤蛋白錶達的影響,其後檢測對內源性SUMO1錶達的敲降效果.[結果]構建的人SUMO1真覈錶達載體pCMV-HA-SUMO1測序正確.針對267、279、293、309、342、386等不同榦涉靶點構建雙啟動子榦擾載體,其中293位點的榦涉載體在Western Blot和熒光檢測試驗中均錶現齣穩定的敲降效果,抑製瞭SUMO1的錶達.[結論]該研究成功構建瞭SUMO1的真覈錶達載體及具有明顯敲降效果的榦涉載體,可為後續研究奠定基礎.
[목적]구건인SUMO1적진핵표체재체,사선SUMO1적유효간섭파점.[방법]장SUMO1아극륭지재체pCMV-HA중.심조가능적간섭위점,합성상하유인물,퇴화후직접극륭입GFP-HU쌍계동자재체.용Western Blot화세포형광적방법검측각재체대외원성SUMO융합단백표체적영향,기후검측대내원성SUMO1표체적고강효과.[결과]구건적인SUMO1진핵표체재체pCMV-HA-SUMO1측서정학.침대267、279、293、309、342、386등불동간섭파점구건쌍계동자간우재체,기중293위점적간섭재체재Western Blot화형광검측시험중균표현출은정적고강효과,억제료SUMO1적표체.[결론]해연구성공구건료SUMO1적진핵표체재체급구유명현고강효과적간섭재체,가위후속연구전정기출.
