畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
6期
765-771
,共7页
甘瑞%左敬%张国升%朱峰伟%孙燕%王鲜忠%张家骅
甘瑞%左敬%張國升%硃峰偉%孫燕%王鮮忠%張傢驊
감서%좌경%장국승%주봉위%손연%왕선충%장가화
促卵泡素%睾丸支持细胞%S期激酶相关蛋白2%细胞外信号调节的蛋白激酶1/2%p27kip1
促卵泡素%睪汍支持細胞%S期激酶相關蛋白2%細胞外信號調節的蛋白激酶1/2%p27kip1
촉란포소%고환지지세포%S기격매상관단백2%세포외신호조절적단백격매1/2%p27kip1
本研究旨在确定促卵泡素是否可通过cAMP、Ca2+内流和细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中S期激酶相关蛋白2(skp2)的表达.以培养的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,运用Western blot检测skp2、p27kip1蛋白的表达,运用实时荧光定量PCR检测skp2 mRNA的表达.结果发现,促卵泡素(50 ng·mL-1)以时间依赖的方式促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),这一作用在30 min时达到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促进了skp2蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),但降低了p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑制了FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的表达有所下降,但提高了p27kip1蛋白的表达,但3种抑制剂单独作用时对skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05).这表明FSH可能主要通过影响cAMP的产生和Ca2+内流,并激活ERK1/2通路调节skp2蛋白的表达,而skp2蛋白的水平与p27kip1蛋白成负相关.
本研究旨在確定促卵泡素是否可通過cAMP、Ca2+內流和細胞外調節的蛋白激酶(ERK1/2)調節培養條件下未成熟仔豬睪汍支持細胞中S期激酶相關蛋白2(skp2)的錶達.以培養的仔豬睪汍支持細胞為實驗材料,通過添加各種信號通路的抑製劑,運用Western blot檢測skp2、p27kip1蛋白的錶達,運用實時熒光定量PCR檢測skp2 mRNA的錶達.結果髮現,促卵泡素(50 ng·mL-1)以時間依賴的方式促進瞭skp2蛋白和mRNA的錶達(P＜0.05),這一作用在30 min時達到高峰.FSH(50 ng·mL-1)和Forsko1in(10 μmol·L-1)均促進瞭skp2蛋白和mRNA的錶達(P＜0.05),但降低瞭p27kip1蛋白的水平,而Rp-cAMP、Verapamil和U0126都抑製瞭FSH的作用,使skp2蛋白和mRNA的錶達有所下降,但提高瞭p27kip1蛋白的錶達,但3種抑製劑單獨作用時對skp2蛋白、mRNA以及p27kip1蛋白的錶達沒有顯著影響(P＞0.05).這錶明FSH可能主要通過影響cAMP的產生和Ca2+內流,併激活ERK1/2通路調節skp2蛋白的錶達,而skp2蛋白的水平與p27kip1蛋白成負相關.
본연구지재학정촉란포소시부가통과cAMP、Ca2+내류화세포외조절적단백격매(ERK1/2)조절배양조건하미성숙자저고환지지세포중S기격매상관단백2(skp2)적표체.이배양적자저고환지지세포위실험재료,통과첨가각충신호통로적억제제,운용Western blot검측skp2、p27kip1단백적표체,운용실시형광정량PCR검측skp2 mRNA적표체.결과발현,촉란포소(50 ng·mL-1)이시간의뢰적방식촉진료skp2단백화mRNA적표체(P＜0.05),저일작용재30 min시체도고봉.FSH(50 ng·mL-1)화Forsko1in(10 μmol·L-1)균촉진료skp2단백화mRNA적표체(P＜0.05),단강저료p27kip1단백적수평,이Rp-cAMP、Verapamil화U0126도억제료FSH적작용,사skp2단백화mRNA적표체유소하강,단제고료p27kip1단백적표체,단3충억제제단독작용시대skp2단백、mRNA이급p27kip1단백적표체몰유현저영향(P＞0.05).저표명FSH가능주요통과영향cAMP적산생화Ca2+내류,병격활ERK1/2통로조절skp2단백적표체,이skp2단백적수평여p27kip1단백성부상관.
