中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
5期
70-74
,共5页
冯宝刚%朱超%王会%武珅%娜日苏%卢晟盛%关伟军
馮寶剛%硃超%王會%武珅%娜日囌%盧晟盛%關偉軍
풍보강%주초%왕회%무신%나일소%로성성%관위군
中国斗鸡%DJ-1%克隆%真核表达%原核表达
中國鬥鷄%DJ-1%剋隆%真覈錶達%原覈錶達
중국두계%DJ-1%극륭%진핵표체%원핵표체
本研究以中国斗鸡λ噬菌体cDNA文库为模板,克隆了DJ-1基因,并构建了pGEx-4T-1-DJ-1原核表达载体和pEGFP-N3-DJ-1真核表达载体,前者用来研究DJ-1蛋白在大肠杆菌表达系统中的优化表达;后者用来转染成纤维细胞系,研究DJ-1蛋白的亚细胞定位和建立转DJ-1基因的细胞模型.试验成功克隆了DJ-1基因的CDS区,并将其定向插入到pGEX-4T-1原核表达载体和pEGFP-N3真核表达载体中.IPTG浓度梯度诱导原核表达结果显示,在0.8 mmol/L时DJ-1蛋白表达量最高;时间梯度结果显示,在8h时DJ-1蛋白表达量最高;真核表达载体转染脂尾羊成纤维细胞后48h阳性率最高,DJ-1蛋白在细胞核和胞质中均有表达,但胞质中居多.上述结果表明,本试验已经建立了稳定的DJ-1蛋白的真核、原核优化的表达系统,为进一步研究DJ-1基因的功能奠定了基础.
本研究以中國鬥鷄λ噬菌體cDNA文庫為模闆,剋隆瞭DJ-1基因,併構建瞭pGEx-4T-1-DJ-1原覈錶達載體和pEGFP-N3-DJ-1真覈錶達載體,前者用來研究DJ-1蛋白在大腸桿菌錶達繫統中的優化錶達;後者用來轉染成纖維細胞繫,研究DJ-1蛋白的亞細胞定位和建立轉DJ-1基因的細胞模型.試驗成功剋隆瞭DJ-1基因的CDS區,併將其定嚮插入到pGEX-4T-1原覈錶達載體和pEGFP-N3真覈錶達載體中.IPTG濃度梯度誘導原覈錶達結果顯示,在0.8 mmol/L時DJ-1蛋白錶達量最高;時間梯度結果顯示,在8h時DJ-1蛋白錶達量最高;真覈錶達載體轉染脂尾羊成纖維細胞後48h暘性率最高,DJ-1蛋白在細胞覈和胞質中均有錶達,但胞質中居多.上述結果錶明,本試驗已經建立瞭穩定的DJ-1蛋白的真覈、原覈優化的錶達繫統,為進一步研究DJ-1基因的功能奠定瞭基礎.
본연구이중국두계λ서균체cDNA문고위모판,극륭료DJ-1기인,병구건료pGEx-4T-1-DJ-1원핵표체재체화pEGFP-N3-DJ-1진핵표체재체,전자용래연구DJ-1단백재대장간균표체계통중적우화표체;후자용래전염성섬유세포계,연구DJ-1단백적아세포정위화건립전DJ-1기인적세포모형.시험성공극륭료DJ-1기인적CDS구,병장기정향삽입도pGEX-4T-1원핵표체재체화pEGFP-N3진핵표체재체중.IPTG농도제도유도원핵표체결과현시,재0.8 mmol/L시DJ-1단백표체량최고;시간제도결과현시,재8h시DJ-1단백표체량최고;진핵표체재체전염지미양성섬유세포후48h양성솔최고,DJ-1단백재세포핵화포질중균유표체,단포질중거다.상술결과표명,본시험이경건립료은정적DJ-1단백적진핵、원핵우화적표체계통,위진일보연구DJ-1기인적공능전정료기출.
