重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
10期
1215-1217
,共3页
ZNF191%腺病毒%表达载体%基因治疗
ZNF191%腺病毒%錶達載體%基因治療
ZNF191%선병독%표체재체%기인치료
目的:构建转录因子ZNF191腺病毒表达载体,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:从HEK293细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增ZNF191基因,并将ZNF191亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及DNA测序鉴定后,将含ZNF191基因的重组穿梭质粒pAdTrack-ZNF 191经PmeⅠ线性化后转化pAdEasy-1感受态细菌.pAdEasy-ZNF191质粒经Pme Ⅰ线性化后转染293T细胞,包装重组腺病毒Ad-ZNF191,并进行PCR鉴定、Western blot检测受感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白的表达.结果:证实pAdTrack-CMV-ZNF191及pAdEasy-ZNF191质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-ZNF191包装成功,腺病毒感染MCF-7细胞内ZNF191蛋白表达明显提高.结论:成功构建了ZNF191基因重组腺病毒表达载体Ad-ZNF191,为进一步研究ZNF191的生物学功能与肿瘤的基因治疗奠定基础.
目的:構建轉錄因子ZNF191腺病毒錶達載體,為進一步研究ZNF191的生物學功能與腫瘤的基因治療奠定基礎.方法:從HEK293細胞中提取總RNA,RT-PCR擴增ZNF191基因,併將ZNF191亞剋隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV中,酶切及DNA測序鑒定後,將含ZNF191基因的重組穿梭質粒pAdTrack-ZNF 191經PmeⅠ線性化後轉化pAdEasy-1感受態細菌.pAdEasy-ZNF191質粒經Pme Ⅰ線性化後轉染293T細胞,包裝重組腺病毒Ad-ZNF191,併進行PCR鑒定、Western blot檢測受感染MCF-7細胞內ZNF191蛋白的錶達.結果:證實pAdTrack-CMV-ZNF191及pAdEasy-ZNF191質粒構建正確,收穫病毒後PCR及DNA測序結果證明Ad-ZNF191包裝成功,腺病毒感染MCF-7細胞內ZNF191蛋白錶達明顯提高.結論:成功構建瞭ZNF191基因重組腺病毒錶達載體Ad-ZNF191,為進一步研究ZNF191的生物學功能與腫瘤的基因治療奠定基礎.
목적:구건전록인자ZNF191선병독표체재체,위진일보연구ZNF191적생물학공능여종류적기인치료전정기출.방법:종HEK293세포중제취총RNA,RT-PCR확증ZNF191기인,병장ZNF191아극륭도천사질립pAdTrack-CMV중,매절급DNA측서감정후,장함ZNF191기인적중조천사질립pAdTrack-ZNF 191경PmeⅠ선성화후전화pAdEasy-1감수태세균.pAdEasy-ZNF191질립경Pme Ⅰ선성화후전염293T세포,포장중조선병독Ad-ZNF191,병진행PCR감정、Western blot검측수감염MCF-7세포내ZNF191단백적표체.결과:증실pAdTrack-CMV-ZNF191급pAdEasy-ZNF191질립구건정학,수획병독후PCR급DNA측서결과증명Ad-ZNF191포장성공,선병독감염MCF-7세포내ZNF191단백표체명현제고.결론:성공구건료ZNF191기인중조선병독표체재체Ad-ZNF191,위진일보연구ZNF191적생물학공능여종류적기인치료전정기출.
