厦门大学学报(自然科学版)
廈門大學學報(自然科學版)
하문대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2012年
3期
391-396
,共6页
林燕真%张雅丽%李瑞银%杨连威%程通%温兰玲
林燕真%張雅麗%李瑞銀%楊連威%程通%溫蘭玲
림연진%장아려%리서은%양련위%정통%온란령
mdr 1基因%RNA干扰%siRNA
mdr 1基因%RNA榦擾%siRNA
mdr 1기인%RNA간우%siRNA
mdr 1基因及其表达产物P-gp是引起肿瘤细胞多药耐药(MDR)的主要原因,抑制mdr 1基因的表达可用于逆转MDR.RNAi可用于特异抑制靶基因的表达,本研究的目的是构建获得可特异有效靶向mdr 1基因的siRNA元件.应用siRNA设计软件与mRNA结构分析软件设计构建了3个分别靶向mdr 1基因mRNA环结构和茎结构的siRNA元件,同时构建了携带mdr1基因序列的luc报告质粒,通过siRNA表达质粒与携带靶序列的报告质粒的共转染抑制实验检测不同siRNA的抑制效率,结果显示靶向环结构siMDR1B具有较好的抑制效率和特异性.进一步将siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染细胞,应用免疫流式细胞术检测显示,相比对照细胞,siMDR1B可显著抑制其转染后mdr1基因产物P-gp蛋白的表达活性.同时采用CCK-8细胞活性检测试剂评价了siMDR1B对细胞活性的影响,结果显示siMDR1B不会影响细胞活性,具有良好的特异性.本研究获得的可有效靶向mdr 1基因的siRNA元件可为进一步开展逆转MDR研究提供重要基础.
mdr 1基因及其錶達產物P-gp是引起腫瘤細胞多藥耐藥(MDR)的主要原因,抑製mdr 1基因的錶達可用于逆轉MDR.RNAi可用于特異抑製靶基因的錶達,本研究的目的是構建穫得可特異有效靶嚮mdr 1基因的siRNA元件.應用siRNA設計軟件與mRNA結構分析軟件設計構建瞭3箇分彆靶嚮mdr 1基因mRNA環結構和莖結構的siRNA元件,同時構建瞭攜帶mdr1基因序列的luc報告質粒,通過siRNA錶達質粒與攜帶靶序列的報告質粒的共轉染抑製實驗檢測不同siRNA的抑製效率,結果顯示靶嚮環結構siMDR1B具有較好的抑製效率和特異性.進一步將siMDR1B錶達載體與mdr1基因錶達載體共轉染細胞,應用免疫流式細胞術檢測顯示,相比對照細胞,siMDR1B可顯著抑製其轉染後mdr1基因產物P-gp蛋白的錶達活性.同時採用CCK-8細胞活性檢測試劑評價瞭siMDR1B對細胞活性的影響,結果顯示siMDR1B不會影響細胞活性,具有良好的特異性.本研究穫得的可有效靶嚮mdr 1基因的siRNA元件可為進一步開展逆轉MDR研究提供重要基礎.
mdr 1기인급기표체산물P-gp시인기종류세포다약내약(MDR)적주요원인,억제mdr 1기인적표체가용우역전MDR.RNAi가용우특이억제파기인적표체,본연구적목적시구건획득가특이유효파향mdr 1기인적siRNA원건.응용siRNA설계연건여mRNA결구분석연건설계구건료3개분별파향mdr 1기인mRNA배결구화경결구적siRNA원건,동시구건료휴대mdr1기인서렬적luc보고질립,통과siRNA표체질립여휴대파서렬적보고질립적공전염억제실험검측불동siRNA적억제효솔,결과현시파향배결구siMDR1B구유교호적억제효솔화특이성.진일보장siMDR1B표체재체여mdr1기인표체재체공전염세포,응용면역류식세포술검측현시,상비대조세포,siMDR1B가현저억제기전염후mdr1기인산물P-gp단백적표체활성.동시채용CCK-8세포활성검측시제평개료siMDR1B대세포활성적영향,결과현시siMDR1B불회영향세포활성,구유량호적특이성.본연구획득적가유효파향mdr 1기인적siRNA원건가위진일보개전역전MDR연구제공중요기출.