CAJ | 학술논문

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子.方法经PCR方法构建msBLyS cDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性.结果 DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致.HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达.经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上.活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖.结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础.
목적용이원성T보조세포표위수식인가용성BLyS돌변체(msBLyS),구건화표체BLyS적신형면역억제분자.방법경PCR방법구건msBLyS cDNA,연후분별여계란청용균매(HEL)혹란청단백(OVA)Th표위DNA서렬중조,행서렬측정후,구건우고효원핵표체재체pQE-80L병전화E.coli DH5α,경IPTG유도표체,Ni-NTA층석순화후,통과세포증식실험검측융합단백적생물학활성.결과 DNA측서표명,중조HELmsBLyS화OVAmsBLyS적DNA서렬여문헌보도적서렬완전일치.HELmsBLyS화OVAmsBLyS재대장간균중이가용성형식고효표체.경Ni-NTA층석순화후,목적단백적순도가체90%이상.활성검측발현,중조단백균불능촉진Raji세포증식.결론성공구건료BLyS적면역억제분자,병획득료고효표체급순화,순화산물이상실료sBLyS소구유적세포증식활성,위진일보탐토기치료작용타하료기출.