暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2006年
3期
470-475
,共6页
蒋泓%唐冬生%李月琴%张欣%李芳%胥斯卡%周天鸿
蔣泓%唐鼕生%李月琴%張訢%李芳%胥斯卡%週天鴻
장홍%당동생%리월금%장흔%리방%서사잡%주천홍
基因打靶%多位点%细菌人工染色体%重组酶系统%奶牛%重复序列
基因打靶%多位點%細菌人工染色體%重組酶繫統%奶牛%重複序列
기인타파%다위점%세균인공염색체%중조매계통%내우%중복서렬
以奶牛为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点,基于BAC重组酶系统构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料.首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GD表达载体.将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GD表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GD质粒,采用归位内切酶I-Sce Ⅰ切除pYLVS载体骨架,构建奶牛多位点基因打靶载体BAC-TDN-GD,利用接头LS使之环化.BAC-TDN-GD打靶载体与pYLSV质粒组成了通用型奶牛多位点打靶载体系统.以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,将部分解决目前存在的打靶效率低、安全性差等问题.
以奶牛為研究對象,以其重複的rRNA基因間的間隔序列為靶位點,基于BAC重組酶繫統構建多位點基因打靶載體,為建立體內多位點基因打靶技術穫得關鍵材料.首先構建BAC-TDN篩選載體,然後構建pYLVS-GD錶達載體.將BAC-TDN篩選載體和pYLVS-GD錶達載體共轉化至大腸桿菌NS3529中,通過Cre重組酶的作用形成BAC-TDN-VS-GD質粒,採用歸位內切酶I-Sce Ⅰ切除pYLVS載體骨架,構建奶牛多位點基因打靶載體BAC-TDN-GD,利用接頭LS使之環化.BAC-TDN-GD打靶載體與pYLSV質粒組成瞭通用型奶牛多位點打靶載體繫統.以重複序列為靶位點的多位點基因打靶技術,將部分解決目前存在的打靶效率低、安全性差等問題.
이내우위연구대상,이기중복적rRNA기인간적간격서렬위파위점,기우BAC중조매계통구건다위점기인타파재체,위건입체내다위점기인타파기술획득관건재료.수선구건BAC-TDN사선재체,연후구건pYLVS-GD표체재체.장BAC-TDN사선재체화pYLVS-GD표체재체공전화지대장간균NS3529중,통과Cre중조매적작용형성BAC-TDN-VS-GD질립,채용귀위내절매I-Sce Ⅰ절제pYLVS재체골가,구건내우다위점기인타파재체BAC-TDN-GD,이용접두LS사지배화.BAC-TDN-GD타파재체여pYLSV질립조성료통용형내우다위점타파재체계통.이중복서렬위파위점적다위점기인타파기술,장부분해결목전존재적타파효솔저、안전성차등문제.
