郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
1期
127-130
,共4页
李雪莲%马一君%武峰%史兆兴%王恒梁%黄留玉
李雪蓮%馬一君%武峰%史兆興%王恆樑%黃留玉
리설련%마일군%무봉%사조흥%왕항량%황류옥
人铜锌超氧化物歧化酶%酿酒酵母%分泌表达
人銅鋅超氧化物歧化酶%釀酒酵母%分泌錶達
인동자초양화물기화매%양주효모%분비표체
目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达.方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插人大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建真核分泌表达质粒pYES-MS,将其转化入酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl中,用半乳糖进行诱导表达,采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性.结果:该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21 000的蛋白并与兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特异的免疫反应,同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌,具有特异性SOD酶活性.结论:作者成功构建了pYES-MS/INV菌株,该菌株大量表达有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,并有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母细胞外,为开发hCu/Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础.
目的:探討釀酒酵母中人銅鋅超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌錶達.方法:採用RT-PCR技術從人胃總RNA中分離擴增hCu/Zn-SOD的cDNA,與釀酒酵母交配因子(MF)α信號肽編碼序列融閤,將融閤基因插人大腸桿菌-酵母細胞穿梭型質粒pYES2.0,構建真覈分泌錶達質粒pYES-MS,將其轉化入釀酒酵母的缺陷型菌株INVScl中,用半乳糖進行誘導錶達,採用SDS-PAGE、蛋白質免疫印跡分析及電泳譜活性染色測定錶達產物分泌情況及其活性.結果:該工程菌可高效錶達一相對分子質量約為21 000的蛋白併與兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特異的免疫反應,同時在培養基上清中檢測到此錶達蛋白的分泌,具有特異性SOD酶活性.結論:作者成功構建瞭pYES-MS/INV菌株,該菌株大量錶達有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,併有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母細胞外,為開髮hCu/Zn-SOD的基因工程產品奠定瞭良好的基礎.
목적:탐토양주효모중인동자초양화물기화매(hCu/Zn-SOD)적분비표체.방법:채용RT-PCR기술종인위총RNA중분리확증hCu/Zn-SOD적cDNA,여양주효모교배인자(MF)α신호태편마서렬융합,장융합기인삽인대장간균-효모세포천사형질립pYES2.0,구건진핵분비표체질립pYES-MS,장기전화입양주효모적결함형균주INVScl중,용반유당진행유도표체,채용SDS-PAGE、단백질면역인적분석급전영보활성염색측정표체산물분비정황급기활성.결과:해공정균가고효표체일상대분자질량약위21 000적단백병여토항인Cu/Zn-SOD다항유특이적면역반응,동시재배양기상청중검측도차표체단백적분비,구유특이성SOD매활성.결론:작자성공구건료pYES-MS/INV균주,해균주대량표체유천연매활성적hCu/Zn-SOD,병유부분hCu/Zn-SOD분비도효모세포외,위개발hCu/Zn-SOD적기인공정산품전정료량호적기출.
