中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
29-34
,共6页
黏蛋白5AC%中性粒细胞弹力酶%Sp-1元件
黏蛋白5AC%中性粒細胞彈力酶%Sp-1元件
점단백5AC%중성립세포탄력매%Sp-1원건
目的:探讨呼吸道黏蛋白(mucin,MUC)5AC基因5'上游序列顺式调控元件在中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导MUC5AC基因转录表达的调控机制.方法:应用DNA重组技术,构建含萤光素酶报告基因和MUC5AC启动子不同长度片段的嵌合质粒.采用定点突变技术,在嵌合质粒的基础上构建MUC5AC启动子区特殊蛋白(specificity protein)-1和核因子(nuclear factor,NF)-κB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性.结果:成功构建了4种含有不同长度MUC5AC基因启动子序列的荧光素酶报告基因质粒.含有启动子序列-1330bp、-689bp、-324bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度较对照组均显著增加,而含有启动子序列-64bp的嵌合质粒荧光素酶相对光强度与对照组相比差异无统计学意义.NE可诱导含有MUC5AC启动子区NF-κB结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-NF-κB-MU)荧光素酶相对光强度增加,而NE不能诱导Sp-1结合位点单独突变体(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)荧光素酶表达增加.结论:MUC5AC 5'上游序列中-324～-64位点存在参与NE诱导MUC5AC基因表达的重要调控元件,位于此区域的顺式作用元件Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用,该位点可能作为靶向性基因治疗的关键调控元件.
目的:探討呼吸道黏蛋白(mucin,MUC)5AC基因5'上遊序列順式調控元件在中性粒細胞彈力酶(neutrophil elastase,NE)誘導MUC5AC基因轉錄錶達的調控機製.方法:應用DNA重組技術,構建含螢光素酶報告基因和MUC5AC啟動子不同長度片段的嵌閤質粒.採用定點突變技術,在嵌閤質粒的基礎上構建MUC5AC啟動子區特殊蛋白(specificity protein)-1和覈因子(nuclear factor,NF)-κB結閤位點單獨突變體,併測定NE刺激的轉染細胞熒光素酶相對活性.結果:成功構建瞭4種含有不同長度MUC5AC基因啟動子序列的熒光素酶報告基因質粒.含有啟動子序列-1330bp、-689bp、-324bp的嵌閤質粒熒光素酶相對光彊度較對照組均顯著增加,而含有啟動子序列-64bp的嵌閤質粒熒光素酶相對光彊度與對照組相比差異無統計學意義.NE可誘導含有MUC5AC啟動子區NF-κB結閤位點單獨突變體(pGL3E-MUC5AC-NF-κB-MU)熒光素酶相對光彊度增加,而NE不能誘導Sp-1結閤位點單獨突變體(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)熒光素酶錶達增加.結論:MUC5AC 5'上遊序列中-324～-64位點存在參與NE誘導MUC5AC基因錶達的重要調控元件,位于此區域的順式作用元件Sp-1位點在NE誘導MUC5AC基因錶達機製中起重要作用,該位點可能作為靶嚮性基因治療的關鍵調控元件.
목적:탐토호흡도점단백(mucin,MUC)5AC기인5'상유서렬순식조공원건재중성립세포탄력매(neutrophil elastase,NE)유도MUC5AC기인전록표체적조공궤제.방법:응용DNA중조기술,구건함형광소매보고기인화MUC5AC계동자불동장도편단적감합질립.채용정점돌변기술,재감합질립적기출상구건MUC5AC계동자구특수단백(specificity protein)-1화핵인자(nuclear factor,NF)-κB결합위점단독돌변체,병측정NE자격적전염세포형광소매상대활성.결과:성공구건료4충함유불동장도MUC5AC기인계동자서렬적형광소매보고기인질립.함유계동자서렬-1330bp、-689bp、-324bp적감합질립형광소매상대광강도교대조조균현저증가,이함유계동자서렬-64bp적감합질립형광소매상대광강도여대조조상비차이무통계학의의.NE가유도함유MUC5AC계동자구NF-κB결합위점단독돌변체(pGL3E-MUC5AC-NF-κB-MU)형광소매상대광강도증가,이NE불능유도Sp-1결합위점단독돌변체(pGL3E-MUC5AC-SP-1-MU)형광소매표체증가.결론:MUC5AC 5'상유서렬중-324～-64위점존재삼여NE유도MUC5AC기인표체적중요조공원건,위우차구역적순식작용원건Sp-1위점재NE유도MUC5AC기인표체궤제중기중요작용,해위점가능작위파향성기인치료적관건조공원건.
