中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
7期
554-559
,共6页
章倩倩%刘松财%戴建威%任晓慧%张永亮
章倩倩%劉鬆財%戴建威%任曉慧%張永亮
장천천%류송재%대건위%임효혜%장영량
CMV 启动子%SP 启动子%双启动子%EGFP%GRF%IGF-Ⅰ
CMV 啟動子%SP 啟動子%雙啟動子%EGFP%GRF%IGF-Ⅰ
CMV 계동자%SP 계동자%쌍계동자%EGFP%GRF%IGF-Ⅰ
构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生长激素释放因子(GRF)表达载体(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射后1周、2周、3周以及4周时,分别提取肌肉组织RNA,应用半定量RT-PCR检测报告基因(EGFP)的表达量,发现pCMV-SP-EGFP组EGFP表达量显著高于pCMV-EGFP组和pSP-EGFP组(P＜0.01);经荧光检测得到了较强的荧光信号.将3种GRF表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌,在注射后每隔10 d记录小鼠累积增重,采血并用RIA法测定血清胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)浓度,结果pCMV-SP-GRF组累积增重、IGF-Ⅰ浓度分别高于生理盐水组、pCMV-GRF组和pSP-GRF组(P＜0.05).结果表明:CMV与SP两种启动子组合,在小鼠骨骼肌内使外源基因表达效率提高.本研究为提高外源基因在肌肉组织的表达提供了新的途径.
構建分彆含有CMV、肌肉特異啟動子SP及雙啟動子CMV-SP的真覈報告基因EGFP錶達載體(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生長激素釋放因子(GRF)錶達載體(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).將3種EGFP錶達質粒分彆註射至小鼠骨骼肌.註射後1週、2週、3週以及4週時,分彆提取肌肉組織RNA,應用半定量RT-PCR檢測報告基因(EGFP)的錶達量,髮現pCMV-SP-EGFP組EGFP錶達量顯著高于pCMV-EGFP組和pSP-EGFP組(P＜0.01);經熒光檢測得到瞭較彊的熒光信號.將3種GRF錶達質粒分彆註射至小鼠骨骼肌,在註射後每隔10 d記錄小鼠纍積增重,採血併用RIA法測定血清胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)濃度,結果pCMV-SP-GRF組纍積增重、IGF-Ⅰ濃度分彆高于生理鹽水組、pCMV-GRF組和pSP-GRF組(P＜0.05).結果錶明:CMV與SP兩種啟動子組閤,在小鼠骨骼肌內使外源基因錶達效率提高.本研究為提高外源基因在肌肉組織的錶達提供瞭新的途徑.
구건분별함유CMV、기육특이계동자SP급쌍계동자CMV-SP적진핵보고기인EGFP표체재체(pCMV-EGFP、pSP-EGFP급pCMV-SP-EGFP)화생장격소석방인자(GRF)표체재체(pCMV-GRF、pSP-GRF화pCMV-SP-GRF).장3충EGFP표체질립분별주사지소서골격기.주사후1주、2주、3주이급4주시,분별제취기육조직RNA,응용반정량RT-PCR검측보고기인(EGFP)적표체량,발현pCMV-SP-EGFP조EGFP표체량현저고우pCMV-EGFP조화pSP-EGFP조(P＜0.01);경형광검측득도료교강적형광신호.장3충GRF표체질립분별주사지소서골격기,재주사후매격10 d기록소서루적증중,채혈병용RIA법측정혈청이도소양생장인자Ⅰ(IGF-Ⅰ)농도,결과pCMV-SP-GRF조루적증중、IGF-Ⅰ농도분별고우생리염수조、pCMV-GRF조화pSP-GRF조(P＜0.05).결과표명:CMV여SP량충계동자조합,재소서골격기내사외원기인표체효솔제고.본연구위제고외원기인재기육조직적표체제공료신적도경.
