CAJ | 학술논문

目的:脐血有核细胞中富含多系前体细胞,具备改善受损神经系统功能的潜能.为此建立阻塞性脑卒中动物模型,探讨脐血有核细胞移植对其治疗的可行性.方法:实验于2004-09/2005-05在深圳市宝安区人民医院动物实验室完成.①实验材料:脐带血取自足月新生儿,由深圳宝安血站研究室提供,产妇及其家属均签署知情同意书.SD清洁级成年大鼠80只,随机取20只作为正常对照组,另60只以电凝法建立阻塞性脑卒中模型.剔除运动功能障碍不典型鼠后,随机取5只作为模型观察,余鼠按1∶1随机分为细胞移植组和模型对照组,当出现单只为尾数时,将其分配在细胞移植组.②实验方法:无菌抽取脐血20 mL,加入乙二胺四乙酸抗凝,Ficoll法分离脐血有核细胞.造模后第10天,细胞移植组大鼠将头部固定,按前囟尾侧3.0 mm,中线旁1.5 mm,深度1.2 mm注入1011 L-1脐血有核细胞悬液5 μL,1 μL/min.模型对照组注射等量无细胞脐血清,正常对照组不给予任何干预.③实验评估:造模后4周,5只模型观察大鼠制作脑切片,行苏木精-伊红染色镜检.各组分别于细胞移植前、细胞移植后2,6周进行横木行走实验和触觉刺激试验,检测其运动和触觉功能的恢复.处死各组大鼠制作病理切片,免疫荧光检测脐血有核细胞在脑内生存和分化情况.结果:正常对照组、细胞移植组、模型对照组各20只、24只、24只进入结果分析.①阻塞性脑卒中模型大鼠病理特征:造模大鼠出现行为障碍,缺血部位出现中风囊,病理切片可见缺血坏死区等阻塞性脑卒中所致脑组织病理损伤.②运动和触觉功能测试:细胞移植前,细胞移植组与模型对照组大鼠的横木行走能力、撕胶纸能力均基本相似(P=0.05),且明显低于正常对照组(P＜0.01).移植后第2周,细胞移植组大鼠两项能力均明显强于模型对照组(P＜0.05),但仍低于正常对照组(P＜0.01).移植后第6周,细胞移植组大鼠的横木行走能力明显改善,与正常对照组基本相似(P＞0.05);撕胶纸能力仍低于正常对照组(P＜0.01).③阳性细胞免疫荧光检测:细胞移植组进针注射部位存在大量抗人RNP/CD45双阳性完整细胞,并向大脑中线、皮层梗死部位迁移.所植入的细胞约2.95%表达胶质纤维酸性蛋白,3.41%表达神经特异性烯醇化酶.结论:移植人脐血有核细胞能有效改善阻塞性脑卒中大鼠的运动和触觉功能缺陷. 目的:臍血有覈細胞中富含多繫前體細胞,具備改善受損神經繫統功能的潛能.為此建立阻塞性腦卒中動物模型,探討臍血有覈細胞移植對其治療的可行性.方法:實驗于2004-09/2005-05在深圳市寶安區人民醫院動物實驗室完成.①實驗材料:臍帶血取自足月新生兒,由深圳寶安血站研究室提供,產婦及其傢屬均籤署知情同意書.SD清潔級成年大鼠80隻,隨機取20隻作為正常對照組,另60隻以電凝法建立阻塞性腦卒中模型.剔除運動功能障礙不典型鼠後,隨機取5隻作為模型觀察,餘鼠按1∶1隨機分為細胞移植組和模型對照組,噹齣現單隻為尾數時,將其分配在細胞移植組.②實驗方法:無菌抽取臍血20 mL,加入乙二胺四乙痠抗凝,Ficoll法分離臍血有覈細胞.造模後第10天,細胞移植組大鼠將頭部固定,按前囟尾側3.0 mm,中線徬1.5 mm,深度1.2 mm註入1011 L-1臍血有覈細胞懸液5 μL,1 μL/min.模型對照組註射等量無細胞臍血清,正常對照組不給予任何榦預.③實驗評估:造模後4週,5隻模型觀察大鼠製作腦切片,行囌木精-伊紅染色鏡檢.各組分彆于細胞移植前、細胞移植後2,6週進行橫木行走實驗和觸覺刺激試驗,檢測其運動和觸覺功能的恢複.處死各組大鼠製作病理切片,免疫熒光檢測臍血有覈細胞在腦內生存和分化情況.結果:正常對照組、細胞移植組、模型對照組各20隻、24隻、24隻進入結果分析.①阻塞性腦卒中模型大鼠病理特徵:造模大鼠齣現行為障礙,缺血部位齣現中風囊,病理切片可見缺血壞死區等阻塞性腦卒中所緻腦組織病理損傷.②運動和觸覺功能測試:細胞移植前,細胞移植組與模型對照組大鼠的橫木行走能力、撕膠紙能力均基本相似(P=0.05),且明顯低于正常對照組(P＜0.01).移植後第2週,細胞移植組大鼠兩項能力均明顯彊于模型對照組(P＜0.05),但仍低于正常對照組(P＜0.01).移植後第6週,細胞移植組大鼠的橫木行走能力明顯改善,與正常對照組基本相似(P＞0.05);撕膠紙能力仍低于正常對照組(P＜0.01).③暘性細胞免疫熒光檢測:細胞移植組進針註射部位存在大量抗人RNP/CD45雙暘性完整細胞,併嚮大腦中線、皮層梗死部位遷移.所植入的細胞約2.95%錶達膠質纖維痠性蛋白,3.41%錶達神經特異性烯醇化酶.結論:移植人臍血有覈細胞能有效改善阻塞性腦卒中大鼠的運動和觸覺功能缺陷.
목적:제혈유핵세포중부함다계전체세포,구비개선수손신경계통공능적잠능.위차건립조새성뇌졸중동물모형,탐토제혈유핵세포이식대기치료적가행성.방법:실험우2004-09/2005-05재심수시보안구인민의원동물실험실완성.①실험재료:제대혈취자족월신생인,유심수보안혈참연구실제공,산부급기가속균첨서지정동의서.SD청길급성년대서80지,수궤취20지작위정상대조조,령60지이전응법건립조새성뇌졸중모형.척제운동공능장애불전형서후,수궤취5지작위모형관찰,여서안1∶1수궤분위세포이식조화모형대조조,당출현단지위미수시,장기분배재세포이식조.②실험방법:무균추취제혈20 mL,가입을이알사을산항응,Ficoll법분리제혈유핵세포.조모후제10천,세포이식조대서장두부고정,안전신미측3.0 mm,중선방1.5 mm,심도1.2 mm주입1011 L-1제혈유핵세포현액5 μL,1 μL/min.모형대조조주사등량무세포제혈청,정상대조조불급여임하간예.③실험평고:조모후4주,5지모형관찰대서제작뇌절편,행소목정-이홍염색경검.각조분별우세포이식전、세포이식후2,6주진행횡목행주실험화촉각자격시험,검측기운동화촉각공능적회복.처사각조대서제작병리절편,면역형광검측제혈유핵세포재뇌내생존화분화정황.결과:정상대조조、세포이식조、모형대조조각20지、24지、24지진입결과분석.①조새성뇌졸중모형대서병리특정:조모대서출현행위장애,결혈부위출현중풍낭,병리절편가견결혈배사구등조새성뇌졸중소치뇌조직병리손상.②운동화촉각공능측시:세포이식전,세포이식조여모형대조조대서적횡목행주능력、시효지능력균기본상사(P=0.05),차명현저우정상대조조(P＜0.01).이식후제2주,세포이식조대서량항능력균명현강우모형대조조(P＜0.05),단잉저우정상대조조(P＜0.01).이식후제6주,세포이식조대서적횡목행주능력명현개선,여정상대조조기본상사(P＞0.05);시효지능력잉저우정상대조조(P＜0.01).③양성세포면역형광검측:세포이식조진침주사부위존재대량항인RNP/CD45쌍양성완정세포,병향대뇌중선、피층경사부위천이.소식입적세포약2.95%표체효질섬유산성단백,3.41%표체신경특이성희순화매.결론:이식인제혈유핵세포능유효개선조새성뇌졸중대서적운동화촉각공능결함.