中国油料作物学报
中國油料作物學報
중국유료작물학보
CHINESE JOURNAL OF OIL CROP SCIENCES
2008年
3期
357-360
,共4页
王巍敏%李云昌%胡琼%程计华%梅德圣%郝建轶
王巍敏%李雲昌%鬍瓊%程計華%梅德聖%郝建軼
왕외민%리운창%호경%정계화%매덕골%학건질
油菜%线粒体DNA%提取%蔗糖垫衬
油菜%線粒體DNA%提取%蔗糖墊襯
유채%선립체DNA%제취%자당점츤
为了建立一种快速、有效的油菜线粒体DNA(mtDNA)提取方法,以30℃黑暗条件下培养的油菜黄化苗为材料,通过差速离心结合蔗糖缓冲液洗涤和垫衬,利用50-250g材料分离线粒体,经SDS裂解后抽提纯化,可从每10g黄化苗中得到1靏以上的mtDNA.所获得的mtDNA经琼脂糖凝胶电泳检测发现仅有一条大小在10kb以上的条带,没有明显的降解现象,完整性良好,适用于PCR等常用分子生物学实验.利用细胞核基因的特异性引物进行PCR检测,证实没有核基因组的污染.与密度梯度离心法提取mtDNA相比,该方法具有对设备要求低、提取效率高、纯度好等优点,是进行线粒体基因组及其控制的重要性状分子生物学研究的关键基础技术.
為瞭建立一種快速、有效的油菜線粒體DNA(mtDNA)提取方法,以30℃黑暗條件下培養的油菜黃化苗為材料,通過差速離心結閤蔗糖緩遲液洗滌和墊襯,利用50-250g材料分離線粒體,經SDS裂解後抽提純化,可從每10g黃化苗中得到1靏以上的mtDNA.所穫得的mtDNA經瓊脂糖凝膠電泳檢測髮現僅有一條大小在10kb以上的條帶,沒有明顯的降解現象,完整性良好,適用于PCR等常用分子生物學實驗.利用細胞覈基因的特異性引物進行PCR檢測,證實沒有覈基因組的汙染.與密度梯度離心法提取mtDNA相比,該方法具有對設備要求低、提取效率高、純度好等優點,是進行線粒體基因組及其控製的重要性狀分子生物學研究的關鍵基礎技術.
위료건립일충쾌속、유효적유채선립체DNA(mtDNA)제취방법,이30℃흑암조건하배양적유채황화묘위재료,통과차속리심결합자당완충액세조화점츤,이용50-250g재료분리선립체,경SDS렬해후추제순화,가종매10g황화묘중득도1학이상적mtDNA.소획득적mtDNA경경지당응효전영검측발현부유일조대소재10kb이상적조대,몰유명현적강해현상,완정성량호,괄용우PCR등상용분자생물학실험.이용세포핵기인적특이성인물진행PCR검측,증실몰유핵기인조적오염.여밀도제도리심법제취mtDNA상비,해방법구유대설비요구저、제취효솔고、순도호등우점,시진행선립체기인조급기공제적중요성상분자생물학연구적관건기출기술.
