解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2011年
1期
45-49
,共5页
王萍%刘保清%李卫红%董凌月%尤红%贾继东%安威%张海燕
王萍%劉保清%李衛紅%董凌月%尤紅%賈繼東%安威%張海燕
왕평%류보청%리위홍%동릉월%우홍%가계동%안위%장해연
肝脏前体细胞%细胞克隆%甲胎蛋白%启动子%免疫荧光
肝髒前體細胞%細胞剋隆%甲胎蛋白%啟動子%免疫熒光
간장전체세포%세포극륭%갑태단백%계동자%면역형광
目的 利用甲胎蛋白启动子活力筛选人胚肝脏前体细胞克隆.方法 经聚合酶链反应(PCR)扩增及酶切后连接,将甲胎蛋白启动子片段构建于pGL3载体中并测序鉴定,将其与pRL-TK质粒共转染到HepG2、A549和HeLa细胞中,通过相对荧光素酶活力分析甲胎蛋白启动子活力的特异性.采用克隆化培养法获得人胚胎肝脏细胞克隆,检测各克隆的甲胎蛋白启动子活力,并应用间接免疫荧光染色方法检测甲胎蛋白表达情况.结果 经PCR、酶切分析及DNA序列测定证实pGL3-AFP质粒克隆成功.将其与pRL-TK质粒共转染到表达甲胎蛋白的HepG2细胞和不表达甲胎蛋白的A549、HeLa细胞中,仅在表达甲胎蛋白的HepG2细胞中检测到了较高的甲胎蛋白启动子活力,胚胎肝脏细胞中也检测到了甲胎蛋白启动子活力,表明其中含有表达甲胎蛋白的细胞.利用克隆培养法获得5个胚胎肝脏细胞克隆,将其分别共转染pGL3-AFP和pRL-TK质粒,发现其中1个克隆的甲胎蛋白启动子活力与HepG2细胞接近,且免疫荧光染色结果显示,该克隆细胞甲胎蛋白阳性率为(99.1±0.6)%,表明此克隆为肝脏前体细胞克隆.结论 利用甲胎蛋白启动子活力结合克隆培养法可以获得肝脏前体细胞克隆.
目的 利用甲胎蛋白啟動子活力篩選人胚肝髒前體細胞剋隆.方法 經聚閤酶鏈反應(PCR)擴增及酶切後連接,將甲胎蛋白啟動子片段構建于pGL3載體中併測序鑒定,將其與pRL-TK質粒共轉染到HepG2、A549和HeLa細胞中,通過相對熒光素酶活力分析甲胎蛋白啟動子活力的特異性.採用剋隆化培養法穫得人胚胎肝髒細胞剋隆,檢測各剋隆的甲胎蛋白啟動子活力,併應用間接免疫熒光染色方法檢測甲胎蛋白錶達情況.結果 經PCR、酶切分析及DNA序列測定證實pGL3-AFP質粒剋隆成功.將其與pRL-TK質粒共轉染到錶達甲胎蛋白的HepG2細胞和不錶達甲胎蛋白的A549、HeLa細胞中,僅在錶達甲胎蛋白的HepG2細胞中檢測到瞭較高的甲胎蛋白啟動子活力,胚胎肝髒細胞中也檢測到瞭甲胎蛋白啟動子活力,錶明其中含有錶達甲胎蛋白的細胞.利用剋隆培養法穫得5箇胚胎肝髒細胞剋隆,將其分彆共轉染pGL3-AFP和pRL-TK質粒,髮現其中1箇剋隆的甲胎蛋白啟動子活力與HepG2細胞接近,且免疫熒光染色結果顯示,該剋隆細胞甲胎蛋白暘性率為(99.1±0.6)%,錶明此剋隆為肝髒前體細胞剋隆.結論 利用甲胎蛋白啟動子活力結閤剋隆培養法可以穫得肝髒前體細胞剋隆.
목적 이용갑태단백계동자활력사선인배간장전체세포극륭.방법 경취합매련반응(PCR)확증급매절후련접,장갑태단백계동자편단구건우pGL3재체중병측서감정,장기여pRL-TK질립공전염도HepG2、A549화HeLa세포중,통과상대형광소매활력분석갑태단백계동자활력적특이성.채용극륭화배양법획득인배태간장세포극륭,검측각극륭적갑태단백계동자활력,병응용간접면역형광염색방법검측갑태단백표체정황.결과 경PCR、매절분석급DNA서렬측정증실pGL3-AFP질립극륭성공.장기여pRL-TK질립공전염도표체갑태단백적HepG2세포화불표체갑태단백적A549、HeLa세포중,부재표체갑태단백적HepG2세포중검측도료교고적갑태단백계동자활력,배태간장세포중야검측도료갑태단백계동자활력,표명기중함유표체갑태단백적세포.이용극륭배양법획득5개배태간장세포극륭,장기분별공전염pGL3-AFP화pRL-TK질립,발현기중1개극륭적갑태단백계동자활력여HepG2세포접근,차면역형광염색결과현시,해극륭세포갑태단백양성솔위(99.1±0.6)%,표명차극륭위간장전체세포극륭.결론 이용갑태단백계동자활력결합극륭배양법가이획득간장전체세포극륭.
