医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2012年
1期
11-15
,共5页
张坤%张伟%高莎莎%吴瑞卿%唐胜建
張坤%張偉%高莎莎%吳瑞卿%唐勝建
장곤%장위%고사사%오서경%당성건
FOXL2l基因%原核表达%纯化%融合蛋白
FOXL2l基因%原覈錶達%純化%融閤蛋白
FOXL2l기인%원핵표체%순화%융합단백
目的 通过pET32a(+)原核表达载体,表达重组人叉头框蛋白L2(human forkhead box L2,FOXL2l),并且进行纯化和鉴定.方法 从正常人血液中提取基因组DNA,利用PCR扩增FOXL2l目的 基因片段,构建FOXL2l原核表达重组质粒[pET32a(+)-FOXL2l]并转化E.coli的BL21(DE3)菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,经His TrapTM FF亲和层析柱纯化,再通过SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果 成功克隆到大小为1 131 bp的人源FOXL2l基因片段并准确插入表达载体pET32a(+),0.1 mmol/L IPTG诱导转化菌8 h可表达大量的FOXL2l蛋白,并可经His TrapTM FF柱亲和层析得到高度纯化.结论 成功获得纯化的66 kD重组人FOXL2l蛋白,为后续进行FOXL2l蛋白的功能研究奠定了基础.
目的 通過pET32a(+)原覈錶達載體,錶達重組人扠頭框蛋白L2(human forkhead box L2,FOXL2l),併且進行純化和鑒定.方法 從正常人血液中提取基因組DNA,利用PCR擴增FOXL2l目的 基因片段,構建FOXL2l原覈錶達重組質粒[pET32a(+)-FOXL2l]併轉化E.coli的BL21(DE3)菌株,IPTG誘導重組蛋白錶達,經His TrapTM FF親和層析柱純化,再通過SDS-PAGE和Western印跡鑒定.結果 成功剋隆到大小為1 131 bp的人源FOXL2l基因片段併準確插入錶達載體pET32a(+),0.1 mmol/L IPTG誘導轉化菌8 h可錶達大量的FOXL2l蛋白,併可經His TrapTM FF柱親和層析得到高度純化.結論 成功穫得純化的66 kD重組人FOXL2l蛋白,為後續進行FOXL2l蛋白的功能研究奠定瞭基礎.
목적 통과pET32a(+)원핵표체재체,표체중조인차두광단백L2(human forkhead box L2,FOXL2l),병차진행순화화감정.방법 종정상인혈액중제취기인조DNA,이용PCR확증FOXL2l목적 기인편단,구건FOXL2l원핵표체중조질립[pET32a(+)-FOXL2l]병전화E.coli적BL21(DE3)균주,IPTG유도중조단백표체,경His TrapTM FF친화층석주순화,재통과SDS-PAGE화Western인적감정.결과 성공극륭도대소위1 131 bp적인원FOXL2l기인편단병준학삽입표체재체pET32a(+),0.1 mmol/L IPTG유도전화균8 h가표체대량적FOXL2l단백,병가경His TrapTM FF주친화층석득도고도순화.결론 성공획득순화적66 kD중조인FOXL2l단백,위후속진행FOXL2l단백적공능연구전정료기출.
