山羊c-Myc原癌基因原核表达和多克隆抗体的制备
산양c-Myc원암기인원핵표체화다극륭항체적제비
Prokaryotic Expression of c-Myc Protoncogene and Preparation of Polyclonal Anti-c-Myc Antibody in Capra Hircus
  • 万方数据
    畜牧兽医学报 축목수의학보

    2012年 6期 867-871 ,共5页

    张昀%刘平%韦友传%李恭贺%辛桂瑜%王丽霞%卢晟盛%张明%卢克焕%郑喜邦

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    山羊%c-Myc基因%蛋白纯化%多克隆抗体 山羊%c-Myc基因%蛋白純化%多剋隆抗體
    산양%c-Myc기인%단백순화%다극륭항체
    c-Myc原癌基因与胚胎干细胞(ES细胞)和诱导的多能性干细胞(iPS细胞)生物学特性密切相关,因此制备其相应的多克隆抗体尤为必要.本研究以pMD18T-Myc质粒为模版,PCR扩增c-Myc片段,然后将其亚克隆到pSE380表达载体上,获得pSE380-Myc重组质粒.该质粒转化工程菌BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Myc融合蛋白,随后用SDS-PAGE电泳及Western blot加以验证.在变性条件下用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Myc融合蛋白,并以此为抗原免疫新西兰大白兔.经过4次免疫,采集血液、分离血清,用Western blot检测抗体特异性.结果表明:(1)pSE380-Myc重组质粒在工程菌BL21( DE3)得到了高效表达；(2)得到了高纯度高含量的His-Myc融合蛋白；(3)经Wstern blot检测发现,c-Myc多克隆抗体与His-Myc融合蛋白能够特异性结合.本研究获得的特异性山羊c-Myc多克隆抗体,为进一步研究山羊ES细胞和iPS细胞的自我更新机制奠定了基础.
    c-Myc원암기인여배태간세포(ES세포)화유도적다능성간세포(iPS세포)생물학특성밀절상관,인차제비기상응적다극륭항체우위필요.본연구이pMD18T-Myc질립위모판,PCR확증c-Myc편단,연후장기아극륭도pSE380표체재체상,획득pSE380-Myc중조질립.해질립전화공정균BL21(DE3),IPTG유도표체His-Myc융합단백,수후용SDS-PAGE전영급Western blot가이험증.재변성조건하용Ni-NTA argrose개질분리순화His-Myc융합단백,병이차위항원면역신서란대백토.경과4차면역,채집혈액、분리혈청,용Western blot검측항체특이성.결과표명:(1)pSE380-Myc중조질립재공정균BL21( DE3)득도료고효표체；(2)득도료고순도고함량적His-Myc융합단백；(3)경Wstern blot검측발현,c-Myc다극륭항체여His-Myc융합단백능구특이성결합.본연구획득적특이성산양c-Myc다극륭항체,위진일보연구산양ES세포화iPS세포적자아경신궤제전정료기출.
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