CAJ | 학술논문

目的摸索人胎脑神经干细胞(hNSC)在动物移植研究中理想的示踪检测方法,探讨hNSC移植后的命运,为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据.方法用添加表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子+白血病抑制因子的N2培养基从流产的人胚胎前脑组织培养出神经干细胞球,通过免疫荧光技术检测神经干细胞巢蛋白(Nestin)抗原标志和细胞分化潜能以鉴定其干细胞属性.取体外培养6 d的神经干细胞集落,进行PKH26标记后培养和分化示踪.将培养14 d的神经球移植到缺氧缺血性脑病的新生鼠侧脑室,12只鼠分为PKH26标记示踪组(4只)、免疫反应检测组(4只)和对照组(4只),于移植后第4、7、14 天杀鼠取脑,全脑切片,行抗人细胞核抗体(抗-hNuc)和抗人神经丝抗体(Anti-hNF)的特异性免疫反应检测及PKH26的荧光观察.结果体外培养获得典型人胎脑神经干细胞球.PKH26能高效标记神经干细胞,标记的阳性率＞95%,标记分子可伴随干细胞增殖、迁移和分化,但不进入细胞突起,仅位于胞体.Anti-hNuc免疫荧光检测和PKH26示踪结果显示:植入脑室的hNSC,4 d即可迁移到嗅球、额叶皮层内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内,小脑蒲氏细胞层有单层标记细胞排列,中脑区域也有广泛的标记细胞分布,损伤灶区有明显多的移植细胞分布.抗-hNF检测结果显示:在大脑皮层的颗粒层有阳性反应细胞,彼此间有连接发生.结论可用PKH26对体外培养获得的hNSC进行标记示踪.Anti-hNuc可用于检测移植细胞在受体鼠脑内的分布,抗-hNF可用于检测移植细胞的成神经元分化及神经元间发生的连接.hNSC经脑室途径移植缺氧缺血性损伤的新生大鼠脑,可快速迁移到全脑多处远距离部位,并构建神经元连接,损伤灶区对移植细胞有牵引作用.
목적모색인태뇌신경간세포(hNSC)재동물이식연구중이상적시종검측방법,탐토hNSC이식후적명운,위신생인결양결혈성뇌손상적간세포치료제공의거.방법용첨가표피생장인자+감성성섬유세포생장인자+백혈병억제인자적N2배양기종유산적인배태전뇌조직배양출신경간세포구,통과면역형광기술검측신경간세포소단백(Nestin)항원표지화세포분화잠능이감정기간세포속성.취체외배양6 d적신경간세포집락,진행PKH26표기후배양화분화시종.장배양14 d적신경구이식도결양결혈성뇌병적신생서측뇌실,12지서분위PKH26표기시종조(4지)、면역반응검측조(4지)화대조조(4지),우이식후제4、7、14 천살서취뇌,전뇌절편,행항인세포핵항체(항-hNuc)화항인신경사항체(Anti-hNF)적특이성면역반응검측급PKH26적형광관찰.결과체외배양획득전형인태뇌신경간세포구.PKH26능고효표기신경간세포,표기적양성솔＞95%,표기분자가반수간세포증식、천이화분화,단불진입세포돌기,부위우포체.Anti-hNuc면역형광검측화PKH26시종결과현시:식입뇌실적hNSC,4 d즉가천이도후구、액협피층내측중앙전구、해마、침협피층등부위적과립층내,소뇌포씨세포층유단층표기세포배렬,중뇌구역야유엄범적표기세포분포,손상조구유명현다적이식세포분포.항-hNF검측결과현시:재대뇌피층적과립층유양성반응세포,피차간유련접발생.결론가용PKH26대체외배양획득적hNSC진행표기시종.Anti-hNuc가용우검측이식세포재수체서뇌내적분포,항-hNF가용우검측이식세포적성신경원분화급신경원간발생적련접.hNSC경뇌실도경이식결양결혈성손상적신생대서뇌,가쾌속천이도전뇌다처원거리부위,병구건신경원련접,손상조구대이식세포유견인작용.