农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2003年
4期
412-416
,共5页
萨仁高娃%刘胜旺%孔宪刚%丁忠庆%乌尼
薩仁高娃%劉勝旺%孔憲剛%丁忠慶%烏尼
살인고왜%류성왕%공헌강%정충경%오니
鸡IL-2融合蛋白%表达%抗体制备
鷄IL-2融閤蛋白%錶達%抗體製備
계IL-2융합단백%표체%항체제비
将编码鸡(Gallus gallus)白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)蛋白的基因亚克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达载体pPROEXTM HT中,构建重组质粒并进行确证性序列测定.然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5 α并用IPTG于37℃诱导培养.SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的鸡IL-2融合蛋白分子量约为19 kD.融合蛋白经薄层扫描发现目的蛋白表达量约占菌体蛋白的30%.包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化.用所获得的重组鸡IL-2融合蛋白及其纯化产物免疫家兔,制备兔抗鸡IL-2多克隆抗血清,并用琼脂扩散实验对多克隆抗血清进行鉴定,表明其与纯化的重组鸡IL-2蛋白具有良好的反应性,而且该反应是特异的.
將編碼鷄(Gallus gallus)白細胞介素-2(interleukin-2,IL-2)蛋白的基因亞剋隆到大腸桿菌(Escherichia coli)原覈錶達載體pPROEXTM HT中,構建重組質粒併進行確證性序列測定.然後將重組質粒轉化大腸桿菌DH5 α併用IPTG于37℃誘導培養.SDS-PAGE和Western blot分析顯示,錶達的鷄IL-2融閤蛋白分子量約為19 kD.融閤蛋白經薄層掃描髮現目的蛋白錶達量約佔菌體蛋白的30%.包涵體被6mol/L鹽痠胍裂解後,通過鎳離子親和樹脂進行瞭純化.用所穫得的重組鷄IL-2融閤蛋白及其純化產物免疫傢兔,製備兔抗鷄IL-2多剋隆抗血清,併用瓊脂擴散實驗對多剋隆抗血清進行鑒定,錶明其與純化的重組鷄IL-2蛋白具有良好的反應性,而且該反應是特異的.
장편마계(Gallus gallus)백세포개소-2(interleukin-2,IL-2)단백적기인아극륭도대장간균(Escherichia coli)원핵표체재체pPROEXTM HT중,구건중조질립병진행학증성서렬측정.연후장중조질립전화대장간균DH5 α병용IPTG우37℃유도배양.SDS-PAGE화Western blot분석현시,표체적계IL-2융합단백분자량약위19 kD.융합단백경박층소묘발현목적단백표체량약점균체단백적30%.포함체피6mol/L염산고렬해후,통과얼리자친화수지진행료순화.용소획득적중조계IL-2융합단백급기순화산물면역가토,제비토항계IL-2다극륭항혈청,병용경지확산실험대다극륭항혈청진행감정,표명기여순화적중조계IL-2단백구유량호적반응성,이차해반응시특이적.
