高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2006年
7期
740-745
,共6页
孙修勤%郑风荣%李继业%吴兴安%曲凌云%张进兴%洪旭光
孫脩勤%鄭風榮%李繼業%吳興安%麯凌雲%張進興%洪旭光
손수근%정풍영%리계업%오흥안%곡릉운%장진흥%홍욱광
淋巴囊肿病毒(LCDV)%核酸疫苗%真核表达载体构建%免疫效果
淋巴囊腫病毒(LCDV)%覈痠疫苗%真覈錶達載體構建%免疫效果
림파낭종병독(LCDV)%핵산역묘%진핵표체재체구건%면역효과
用淋巴囊肿病毒LCDV-cn感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,用RTPCR法获得了LCDV-cn主要衣壳蛋白(MCP)0.6kb基因片段.将该LCDV-cn-MCP0.6kb片断克隆入真核表达载体pEGFP-N2,得到重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6.采用脂质体法将重组质粒转染入牙鲆鳃细胞系FEC,并进行瞬时表达.通过荧光显微镜观察和特异性RT-PCR检测,证实重组质粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6kb已成功转染到FEC细胞,并得到了初步表达.将重组质粒肌注入牙鲆体内,检测牙鲆外周血、肠、脾脏、前肾和淋巴细胞的增殖反应、呼吸爆发活性及抗体产生水平.结果表明,构建的核酸疫苗pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6可诱导牙鲆特异性体液免疫和细胞免疫,具有明显的免疫保护作用.
用淋巴囊腫病毒LCDV-cn感染牙鲆鰓細胞繫FG-9307,提取細胞總RNA,用RTPCR法穫得瞭LCDV-cn主要衣殼蛋白(MCP)0.6kb基因片段.將該LCDV-cn-MCP0.6kb片斷剋隆入真覈錶達載體pEGFP-N2,得到重組質粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6.採用脂質體法將重組質粒轉染入牙鲆鰓細胞繫FEC,併進行瞬時錶達.通過熒光顯微鏡觀察和特異性RT-PCR檢測,證實重組質粒pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6kb已成功轉染到FEC細胞,併得到瞭初步錶達.將重組質粒肌註入牙鲆體內,檢測牙鲆外週血、腸、脾髒、前腎和淋巴細胞的增殖反應、呼吸爆髮活性及抗體產生水平.結果錶明,構建的覈痠疫苗pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6可誘導牙鲆特異性體液免疫和細胞免疫,具有明顯的免疫保護作用.
용림파낭종병독LCDV-cn감염아평새세포계FG-9307,제취세포총RNA,용RTPCR법획득료LCDV-cn주요의각단백(MCP)0.6kb기인편단.장해LCDV-cn-MCP0.6kb편단극륭입진핵표체재체pEGFP-N2,득도중조질립pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6.채용지질체법장중조질립전염입아평새세포계FEC,병진행순시표체.통과형광현미경관찰화특이성RT-PCR검측,증실중조질립pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6kb이성공전염도FEC세포,병득도료초보표체.장중조질립기주입아평체내,검측아평외주혈、장、비장、전신화림파세포적증식반응、호흡폭발활성급항체산생수평.결과표명,구건적핵산역묘pEGFP-N2-LCDV-cn-MCP 0.6가유도아평특이성체액면역화세포면역,구유명현적면역보호작용.
