农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
393-397
,共5页
伍小松%黄复深%郝知友%袁鑫%邱元%陈尔曼
伍小鬆%黃複深%郝知友%袁鑫%邱元%陳爾曼
오소송%황복심%학지우%원흠%구원%진이만
日本血吸虫%SjIR3基因%原核表达%小鼠%免疫保护力
日本血吸蟲%SjIR3基因%原覈錶達%小鼠%免疫保護力
일본혈흡충%SjIR3기인%원핵표체%소서%면역보호력
为鉴定日本血吸虫重组蛋白SjIR3(rSjIR3)诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力,根据已报道的SjIR3(AY251481)的cDNA序列设计1对特异性引物,以日本血吸虫(Schistosoma japonicum)cDNA文库为模板扩增SjIR3基因,克隆到pMD-18-simple-T载体上,测序后进行生物信息学分析.然后将SjIR3基因克隆到pET-32a(+)原核表达载体中构建重组质粒pET-32a(+)/SjIR3,转化Escherichia coli BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.结果表明SjIR3具有PS50204和SSF69572两个结构域(domain),属泛素样蛋白激酶家族,重组蛋白rSjIR3具有良好的免疫原性.动物保护试验采用昆明小鼠,结果表明rSjIR3及rSjIR3+FCA可诱导小鼠产生高水平的抗体应答及26.63%和36.38%的减虫率,以及34.79%和44.09%的减卵率.表明日本血吸虫rSjIR3可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用.
為鑒定日本血吸蟲重組蛋白SjIR3(rSjIR3)誘導小鼠抗攻擊感染的免疫保護力,根據已報道的SjIR3(AY251481)的cDNA序列設計1對特異性引物,以日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)cDNA文庫為模闆擴增SjIR3基因,剋隆到pMD-18-simple-T載體上,測序後進行生物信息學分析.然後將SjIR3基因剋隆到pET-32a(+)原覈錶達載體中構建重組質粒pET-32a(+)/SjIR3,轉化Escherichia coli BL21,IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE及Western blot分析鑒定.結果錶明SjIR3具有PS50204和SSF69572兩箇結構域(domain),屬汎素樣蛋白激酶傢族,重組蛋白rSjIR3具有良好的免疫原性.動物保護試驗採用昆明小鼠,結果錶明rSjIR3及rSjIR3+FCA可誘導小鼠產生高水平的抗體應答及26.63%和36.38%的減蟲率,以及34.79%和44.09%的減卵率.錶明日本血吸蟲rSjIR3可誘導小鼠產生一定的免疫保護作用.
위감정일본혈흡충중조단백SjIR3(rSjIR3)유도소서항공격감염적면역보호력,근거이보도적SjIR3(AY251481)적cDNA서렬설계1대특이성인물,이일본혈흡충(Schistosoma japonicum)cDNA문고위모판확증SjIR3기인,극륭도pMD-18-simple-T재체상,측서후진행생물신식학분석.연후장SjIR3기인극륭도pET-32a(+)원핵표체재체중구건중조질립pET-32a(+)/SjIR3,전화Escherichia coli BL21,IPTG유도표체,경SDS-PAGE급Western blot분석감정.결과표명SjIR3구유PS50204화SSF69572량개결구역(domain),속범소양단백격매가족,중조단백rSjIR3구유량호적면역원성.동물보호시험채용곤명소서,결과표명rSjIR3급rSjIR3+FCA가유도소서산생고수평적항체응답급26.63%화36.38%적감충솔,이급34.79%화44.09%적감란솔.표명일본혈흡충rSjIR3가유도소서산생일정적면역보호작용.
