中国美容医学
中國美容醫學
중국미용의학
CHINESE JOURNAL OF AESTHETIC MEDICINE
2007年
4期
447-450
,共4页
邵小钧%孙沫逸%李连科%陈伟%杨耀武%李建虎
邵小鈞%孫沫逸%李連科%陳偉%楊耀武%李建虎
소소균%손말일%리련과%진위%양요무%리건호
p12DOC-1蛋白%口腔癌缺失%基因克隆%基因表达
p12DOC-1蛋白%口腔癌缺失%基因剋隆%基因錶達
p12DOC-1단백%구강암결실%기인극륭%기인표체
目的:克隆DOC-1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白.方法:从人胎脑组织中提取总RNA,经逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增DOC-1的CDS序列,再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD 18-T和pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化E.ColiBL21,用IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B柱亲和层析纯化重组蛋白.结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC-1长度一致,测序结果与GenBank公布的DOC-1基因序列完全一致,IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量38 000左右出现新的蛋白表达条带,经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白.结论:成功构建了pGEX-4T-1-DOC-1原核表达载体,表达并纯化出GST-p12重组蛋白,为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础.
目的:剋隆DOC-1基因、構建原覈錶達載體併純化齣其重組蛋白.方法:從人胎腦組織中提取總RNA,經逆轉錄一聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)擴增DOC-1的CDS序列,再通過基因重組技術將該基因片段依次剋隆到pMD 18-T和pGEX-4T-1載體中,構建融閤錶達載體pGEX-4T-1-DOC-1,經酶切、測序鑒定後,用該重組質粒轉化E.ColiBL21,用IPTG誘導錶達,Glutathione Sepharose 4B柱親和層析純化重組蛋白.結果:電泳證實RT-PCR擴增產物與預期目的基因DOC-1長度一緻,測序結果與GenBank公佈的DOC-1基因序列完全一緻,IPTG誘導後經SDS-PAGE電泳分析錶明,在相對分子質量38 000左右齣現新的蛋白錶達條帶,經親和層析柱純化後得到高純度的GST-p12重組蛋白.結論:成功構建瞭pGEX-4T-1-DOC-1原覈錶達載體,錶達併純化齣GST-p12重組蛋白,為進一步研究p12DOC-1蛋白打下瞭實驗基礎.
목적:극륭DOC-1기인、구건원핵표체재체병순화출기중조단백.방법:종인태뇌조직중제취총RNA,경역전록일취합매련식반응(RT-PCR)확증DOC-1적CDS서렬,재통과기인중조기술장해기인편단의차극륭도pMD 18-T화pGEX-4T-1재체중,구건융합표체재체pGEX-4T-1-DOC-1,경매절、측서감정후,용해중조질립전화E.ColiBL21,용IPTG유도표체,Glutathione Sepharose 4B주친화층석순화중조단백.결과:전영증실RT-PCR확증산물여예기목적기인DOC-1장도일치,측서결과여GenBank공포적DOC-1기인서렬완전일치,IPTG유도후경SDS-PAGE전영분석표명,재상대분자질량38 000좌우출현신적단백표체조대,경친화층석주순화후득도고순도적GST-p12중조단백.결론:성공구건료pGEX-4T-1-DOC-1원핵표체재체,표체병순화출GST-p12중조단백,위진일보연구p12DOC-1단백타하료실험기출.
