华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2009年
1期
59-63
,共5页
徐慧婷%于世英%翁丹卉%庄亮
徐慧婷%于世英%翁丹卉%莊亮
서혜정%우세영%옹단훼%장량
环氧化酶-2%小分子干扰RNA%HeLa细胞%细胞增殖%细胞周期
環氧化酶-2%小分子榦擾RNA%HeLa細胞%細胞增殖%細胞週期
배양화매-2%소분자간우RNA%HeLa세포%세포증식%세포주기
目的 建立以小分子干扰RNA(siRNA)抑制环氧化酶-2(COX-2)表达的宫颈癌HeLa细胞模型,探讨COX-2在肿瘤细胞增殖、凋亡方面的作用和可能机制.方法 构建靶向抑制COX-2的siRNA表达载体,转染HeLa细胞,Western blot法确定筛选的稳定表达siRNA的转化克隆COX-2表达受抑制;流式细胞仪检测RNA干扰(RNAi)抑制COX-2表达后细胞凋亡和细胞周期的变化;克隆形成试验检测细胞克隆形成率;RT-PCR及Western blot法检测ku70、ku80的表达变化.结果 获得稳定表达siRNA的转化细胞株(HeLa/COX-2i),其COX-2蛋白表达明显受抑制,而转入阴性对照质粒的细胞株(HeLa/Negi)COX-2蛋白表达不受影响;HeLa/COX-2i细胞的克隆形成率[(45±4)%]显著低于HeLa细胞[(85±7)%](P<0.01);HeLa,HeLa/Negi,HeLa/COX-2i 3株细胞的细胞周期分布以及细胞凋亡率差异无显著性意义;RT-PCR及Western blot显示RNAi抑制COX-2表达后ku70、ku80在转录和翻译水平均受抑制.结论 RNAi抑制COX-2表达后可抑制HeLa细胞增殖,其机制可能与ku70、ku80的表达下调有关.
目的 建立以小分子榦擾RNA(siRNA)抑製環氧化酶-2(COX-2)錶達的宮頸癌HeLa細胞模型,探討COX-2在腫瘤細胞增殖、凋亡方麵的作用和可能機製.方法 構建靶嚮抑製COX-2的siRNA錶達載體,轉染HeLa細胞,Western blot法確定篩選的穩定錶達siRNA的轉化剋隆COX-2錶達受抑製;流式細胞儀檢測RNA榦擾(RNAi)抑製COX-2錶達後細胞凋亡和細胞週期的變化;剋隆形成試驗檢測細胞剋隆形成率;RT-PCR及Western blot法檢測ku70、ku80的錶達變化.結果 穫得穩定錶達siRNA的轉化細胞株(HeLa/COX-2i),其COX-2蛋白錶達明顯受抑製,而轉入陰性對照質粒的細胞株(HeLa/Negi)COX-2蛋白錶達不受影響;HeLa/COX-2i細胞的剋隆形成率[(45±4)%]顯著低于HeLa細胞[(85±7)%](P<0.01);HeLa,HeLa/Negi,HeLa/COX-2i 3株細胞的細胞週期分佈以及細胞凋亡率差異無顯著性意義;RT-PCR及Western blot顯示RNAi抑製COX-2錶達後ku70、ku80在轉錄和翻譯水平均受抑製.結論 RNAi抑製COX-2錶達後可抑製HeLa細胞增殖,其機製可能與ku70、ku80的錶達下調有關.
목적 건립이소분자간우RNA(siRNA)억제배양화매-2(COX-2)표체적궁경암HeLa세포모형,탐토COX-2재종류세포증식、조망방면적작용화가능궤제.방법 구건파향억제COX-2적siRNA표체재체,전염HeLa세포,Western blot법학정사선적은정표체siRNA적전화극륭COX-2표체수억제;류식세포의검측RNA간우(RNAi)억제COX-2표체후세포조망화세포주기적변화;극륭형성시험검측세포극륭형성솔;RT-PCR급Western blot법검측ku70、ku80적표체변화.결과 획득은정표체siRNA적전화세포주(HeLa/COX-2i),기COX-2단백표체명현수억제,이전입음성대조질립적세포주(HeLa/Negi)COX-2단백표체불수영향;HeLa/COX-2i세포적극륭형성솔[(45±4)%]현저저우HeLa세포[(85±7)%](P<0.01);HeLa,HeLa/Negi,HeLa/COX-2i 3주세포적세포주기분포이급세포조망솔차이무현저성의의;RT-PCR급Western blot현시RNAi억제COX-2표체후ku70、ku80재전록화번역수평균수억제.결론 RNAi억제COX-2표체후가억제HeLa세포증식,기궤제가능여ku70、ku80적표체하조유관.
