上海海洋大学学报
上海海洋大學學報
상해해양대학학보
JOURNAL OF SHANGHAI OCEAN UNIVERSITY
2009年
3期
257-262
,共6页
丁莹%潘迎捷%赵勇%孙晓红%金维荣%徐晓晶%秦红友
丁瑩%潘迎捷%趙勇%孫曉紅%金維榮%徐曉晶%秦紅友
정형%반영첩%조용%손효홍%금유영%서효정%진홍우
副溶血弧菌%耐热直接溶血毒素%克隆%纯化蛋白
副溶血弧菌%耐熱直接溶血毒素%剋隆%純化蛋白
부용혈호균%내열직접용혈독소%극륭%순화단백
根据GenBank上已有的副溶血弧菌耐热直接溶血毒素的基因序列,设计并人工合成引物.将耐热直接溶血毒素的基因全长克隆到大肠杆菌表达载体pGEX- 4T-1上,构建重组表达载体tdhA/pGEX- 4T-1和tdhS/pGEX- 4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达的工程菌株.优化诱导表达条件,表达耐热直接溶血毒素.转化有重组质粒tdhA/pGEX- 4T-1,tdhS/pGEX- 4T-1的BL21可稳定高效地表达可溶形式的目的蛋白.表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,用GST琼脂糖珠柱亲和层析纯化.溶血实验表明,表达的蛋白具有溶血活性.
根據GenBank上已有的副溶血弧菌耐熱直接溶血毒素的基因序列,設計併人工閤成引物.將耐熱直接溶血毒素的基因全長剋隆到大腸桿菌錶達載體pGEX- 4T-1上,構建重組錶達載體tdhA/pGEX- 4T-1和tdhS/pGEX- 4T-1,轉化大腸桿菌BL21(DE3),得到錶達的工程菌株.優化誘導錶達條件,錶達耐熱直接溶血毒素.轉化有重組質粒tdhA/pGEX- 4T-1,tdhS/pGEX- 4T-1的BL21可穩定高效地錶達可溶形式的目的蛋白.錶達產物用聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定,用GST瓊脂糖珠柱親和層析純化.溶血實驗錶明,錶達的蛋白具有溶血活性.
근거GenBank상이유적부용혈호균내열직접용혈독소적기인서렬,설계병인공합성인물.장내열직접용혈독소적기인전장극륭도대장간균표체재체pGEX- 4T-1상,구건중조표체재체tdhA/pGEX- 4T-1화tdhS/pGEX- 4T-1,전화대장간균BL21(DE3),득도표체적공정균주.우화유도표체조건,표체내열직접용혈독소.전화유중조질립tdhA/pGEX- 4T-1,tdhS/pGEX- 4T-1적BL21가은정고효지표체가용형식적목적단백.표체산물용취병희선알응효전영감정,용GST경지당주주친화층석순화.용혈실험표명,표체적단백구유용혈활성.
