高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2012年
10期
2269-2274
,共6页
周丽君%黄启欣%雷红涛%王欲晓%王强%徐振林%王弘%孙远明
週麗君%黃啟訢%雷紅濤%王欲曉%王彊%徐振林%王弘%孫遠明
주려군%황계흔%뢰홍도%왕욕효%왕강%서진림%왕홍%손원명
二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药%单链抗体%噬菌体展示%广谱特异性
二乙氧基硫代燐痠酯類有機燐農藥%單鏈抗體%噬菌體展示%廣譜特異性
이을양기류대린산지류유궤린농약%단련항체%서균체전시%엄보특이성
从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3 MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000；scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.
從分泌抗二乙氧基硫代燐痠酯類有機燐農藥(DPPs)單剋隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞繫(12C2)中提取瞭總RNA,經RT-PCR反轉錄成cDNA,設計帶linker引物,採用重疊延伸PCR製備單鏈抗體(scFv)基因,將其剋隆到噬菌體載體p3 MH中,構建成噬菌體單鏈抗體錶達載體,轉化大腸桿菌錶達齣噬菌體錶麵展示scFv,對經過Phage-ELISA鑒定的暘性剋隆進行噬菌體外殼蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG誘導其可溶性錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鑒定,併與親本MAb進行性能對比.結果錶明,可溶性錶達的scFv分子量為27000；scFv與DPPs的交扠反應率比其親本MAb提高瞭1.3～3.5倍,錶明其廣譜特異性有所提高.由于scFv與MAb相比具有諸多優點,因此本研究為有機燐農藥多殘留檢測方法的建立提供瞭一種更廣譜、更靈敏的新型識彆分子.
종분비항이을양기류대린산지류유궤린농약(DPPs)단극륭항체(MAb)적잡교류세포계(12C2)중제취료총RNA,경RT-PCR반전록성cDNA,설계대linker인물,채용중첩연신PCR제비단련항체(scFv)기인,장기극륭도서균체재체p3 MH중,구건성서균체단련항체표체재체,전화대장간균표체출서균체표면전시scFv,대경과Phage-ELISA감정적양성극륭진행서균체외각단백기인geneⅢ적거제,용IPTG유도기가용성표체,대표체산물진행SDS-PAGE,Western-Blot급ELISA감정,병여친본MAb진행성능대비.결과표명,가용성표체적scFv분자량위27000；scFv여DPPs적교차반응솔비기친본MAb제고료1.3～3.5배,표명기엄보특이성유소제고.유우scFv여MAb상비구유제다우점,인차본연구위유궤린농약다잔류검측방법적건립제공료일충경엄보、경령민적신형식별분자.
