CAJ | 학술논문

根据GenBank中山羊痘病毒(AY077835) gp063基因DNA序列,应用Beacon Designer7.0软件,设计合成1对引物和1条TaqMan探针,同时制备含有靶DNA序列的pEASY-T1重组质粒标准品.通过引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了山羊痘病毒TaqMan法实时荧光定量PCR.该方法组内和组间重复试验变异系数均低于2％,最低浓度检测极限值为1 ×100 copies/μL,上机检测时间少于40 min.运用该方法对不同时期流行于云南局部的山羊痘临床组织病料进行定量检测,生成的标准曲线斜率(Slope)为-3.36,截距(Intercept)为41.08,相关系数(R2)为0.999 989,阳性对照及送捡样品抽提DNA中病毒含量依次为:P(TK)2.70×105 copies/μL,华坪(HP)毒株1.45×106 copies/μL,景谷(JG)毒株5.12×105 copies/μL,保山(BS)毒株2.96×105 copies/μL,宣威(XW)毒株1.86×105 copies/μL,永胜(YS)毒株1.36×103 copies/μL.结果表明:所建立方法具有灵敏、特异、安全、快速的特点,适合于山羊痘的早期检测.
근거GenBank중산양두병독(AY077835) gp063기인DNA서렬,응용Beacon Designer7.0연건,설계합성1대인물화1조TaqMan탐침,동시제비함유파DNA서렬적pEASY-T1중조질립표준품.통과인물、탐침농도적사선급반응조건적우화,건립료산양두병독TaqMan법실시형광정량PCR.해방법조내화조간중복시험변이계수균저우2％,최저농도검측겁한치위1 ×100 copies/μL,상궤검측시간소우40 min.운용해방법대불동시기류행우운남국부적산양두림상조직병료진행정량검측,생성적표준곡선사솔(Slope)위-3.36,절거(Intercept)위41.08,상관계수(R2)위0.999 989,양성대조급송검양품추제DNA중병독함량의차위:P(TK)2.70×105 copies/μL,화평(HP)독주1.45×106 copies/μL,경곡(JG)독주5.12×105 copies/μL,보산(BS)독주2.96×105 copies/μL,선위(XW)독주1.86×105 copies/μL,영성(YS)독주1.36×103 copies/μL.결과표명:소건립방법구유령민、특이、안전、쾌속적특점,괄합우산양두적조기검측.