中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2003年
14期
1246-1250
,共5页
郑黎燕%奚永志%孔繁华%崔建武%粱飞%刘楠%孙玉英%郭斯启
鄭黎燕%奚永誌%孔繁華%崔建武%粱飛%劉楠%孫玉英%郭斯啟
정려연%해영지%공번화%최건무%량비%류남%손옥영%곽사계
重组融合蛋白质类%白细胞介素6%内质网
重組融閤蛋白質類%白細胞介素6%內質網
중조융합단백질류%백세포개소6%내질망
目的构建能高度特异地靶向杀伤高表达白细胞介素6受体(IL-6R)白血病细胞的新型重组IL6-PE40KDEL(绿脓杆菌外毒素)融合蛋白.方法通过定点诱变将绿脓杆菌外毒素PE40基因羧基端最后5个氨基酸REDLK替换成内质网蛋白滞留序列(KDEL),采用重叠延伸的基因融合技术将N-末端缺失24个氨基酸的人IL6(IL6D24)cDNA与PE40KDEL基因进行重组融合构建,利用HB101/pBV220表达系统实现该新型重组IL6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,经MonoQ柱层析纯化后,以四甲基偶氮唑类似物(MTS)法检测IL6D24-PE40KDEL的靶向杀伤活性.结果构建的新型重组IL6D24-PE40KDEL融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到40%左右;经包涵体分离、复性、变性及纯化所得该融合蛋白纯度＞95%;纯化的融合蛋白能与IL6抗体及绿脓杆菌外毒素A(PEA)抗体发生特异性结合;IL6D24-PE40KDEL融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL6R的U937细胞,IC50约为250 ng/ml,而对不表达IL6R的人T淋巴白血病细胞系则无杀伤作用.结论成功构建了具有靶向杀伤高表达IL6R白血病细胞的新型重组IL6D24-PE40KDEL融合蛋白,为深入地探索利用IL6/IL6R系统介导靶向治疗高表达IL6R白血病奠定了坚实的基础.
目的構建能高度特異地靶嚮殺傷高錶達白細胞介素6受體(IL-6R)白血病細胞的新型重組IL6-PE40KDEL(綠膿桿菌外毒素)融閤蛋白.方法通過定點誘變將綠膿桿菌外毒素PE40基因羧基耑最後5箇氨基痠REDLK替換成內質網蛋白滯留序列(KDEL),採用重疊延伸的基因融閤技術將N-末耑缺失24箇氨基痠的人IL6(IL6D24)cDNA與PE40KDEL基因進行重組融閤構建,利用HB101/pBV220錶達繫統實現該新型重組IL6D24-PE40KDEL外毒素融閤蛋白在大腸桿菌中的高效錶達,經MonoQ柱層析純化後,以四甲基偶氮唑類似物(MTS)法檢測IL6D24-PE40KDEL的靶嚮殺傷活性.結果構建的新型重組IL6D24-PE40KDEL融閤蛋白在大腸桿菌中的錶達水平達到40%左右;經包涵體分離、複性、變性及純化所得該融閤蛋白純度＞95%;純化的融閤蛋白能與IL6抗體及綠膿桿菌外毒素A(PEA)抗體髮生特異性結閤;IL6D24-PE40KDEL融閤蛋白能高度特異地選擇性殺傷高錶達IL6R的U937細胞,IC50約為250 ng/ml,而對不錶達IL6R的人T淋巴白血病細胞繫則無殺傷作用.結論成功構建瞭具有靶嚮殺傷高錶達IL6R白血病細胞的新型重組IL6D24-PE40KDEL融閤蛋白,為深入地探索利用IL6/IL6R繫統介導靶嚮治療高錶達IL6R白血病奠定瞭堅實的基礎.
목적구건능고도특이지파향살상고표체백세포개소6수체(IL-6R)백혈병세포적신형중조IL6-PE40KDEL(록농간균외독소)융합단백.방법통과정점유변장록농간균외독소PE40기인최기단최후5개안기산REDLK체환성내질망단백체류서렬(KDEL),채용중첩연신적기인융합기술장N-말단결실24개안기산적인IL6(IL6D24)cDNA여PE40KDEL기인진행중조융합구건,이용HB101/pBV220표체계통실현해신형중조IL6D24-PE40KDEL외독소융합단백재대장간균중적고효표체,경MonoQ주층석순화후,이사갑기우담서유사물(MTS)법검측IL6D24-PE40KDEL적파향살상활성.결과구건적신형중조IL6D24-PE40KDEL융합단백재대장간균중적표체수평체도40%좌우;경포함체분리、복성、변성급순화소득해융합단백순도＞95%;순화적융합단백능여IL6항체급록농간균외독소A(PEA)항체발생특이성결합;IL6D24-PE40KDEL융합단백능고도특이지선택성살상고표체IL6R적U937세포,IC50약위250 ng/ml,이대불표체IL6R적인T림파백혈병세포계칙무살상작용.결론성공구건료구유파향살상고표체IL6R백혈병세포적신형중조IL6D24-PE40KDEL융합단백,위심입지탐색이용IL6/IL6R계통개도파향치료고표체IL6R백혈병전정료견실적기출.
