免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2004年
5期
334-337,342
,共5页
张磊%杨珏琴%姚芳娟%许玲娣%范丽安
張磊%楊玨琴%姚芳娟%許玲娣%範麗安
장뢰%양각금%요방연%허령제%범려안
HLA-C%HLA-G%双顺反子载体pVITRO2%双表达质粒
HLA-C%HLA-G%雙順反子載體pVITRO2%雙錶達質粒
HLA-C%HLA-G%쌍순반자재체pVITRO2%쌍표체질립
目的构建人HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体.方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织有核细胞总mRNA中逆转录扩增全长HLA-C和HLA-G cDNA,首先将HLA-G经BamHⅠ和Cla Ⅰ双酶切,HLA-C经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后,分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2)中,然后经酶切和测序鉴定,确定已建立pVITRO2的单表达质粒pVITRO2-HLA-G和pVITRO2-HLA-C,再将HLA-C cDNA经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,定向插入单表达质粒pVITRO2-HLA-G的多克隆位点2(mcs2)中,经PCR反应初筛,再经双酶切鉴定.结果限制性内切酶和测序分析表明已成功构建了HLA-Cw*0103和HLA-G*0101的单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G以及双表达质粒pVITRO2-HLA-CG.结论本研究成功构建了真核细胞双顺反子载体pVITRO2的双表达质粒pVITRO2-HLA-CG,以及单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G.
目的構建人HLA-C和HLA-G基因真覈細胞雙錶達載體.方法用RT-PCR從孕婦蛻膜組織有覈細胞總mRNA中逆轉錄擴增全長HLA-C和HLA-G cDNA,首先將HLA-G經BamHⅠ和Cla Ⅰ雙酶切,HLA-C經EcoRⅠ和Xho Ⅰ雙酶切後,分彆定嚮插入真覈細胞雙順反子載體pVITRO2的多剋隆位點1(mcs1)和2(mcs2)中,然後經酶切和測序鑒定,確定已建立pVITRO2的單錶達質粒pVITRO2-HLA-G和pVITRO2-HLA-C,再將HLA-C cDNA經EcoRⅠ和Xho Ⅰ雙酶切,定嚮插入單錶達質粒pVITRO2-HLA-G的多剋隆位點2(mcs2)中,經PCR反應初篩,再經雙酶切鑒定.結果限製性內切酶和測序分析錶明已成功構建瞭HLA-Cw*0103和HLA-G*0101的單錶達質粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G以及雙錶達質粒pVITRO2-HLA-CG.結論本研究成功構建瞭真覈細胞雙順反子載體pVITRO2的雙錶達質粒pVITRO2-HLA-CG,以及單錶達質粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G.
목적구건인HLA-C화HLA-G기인진핵세포쌍표체재체.방법용RT-PCR종잉부세막조직유핵세포총mRNA중역전록확증전장HLA-C화HLA-G cDNA,수선장HLA-G경BamHⅠ화Cla Ⅰ쌍매절,HLA-C경EcoRⅠ화Xho Ⅰ쌍매절후,분별정향삽입진핵세포쌍순반자재체pVITRO2적다극륭위점1(mcs1)화2(mcs2)중,연후경매절화측서감정,학정이건립pVITRO2적단표체질립pVITRO2-HLA-G화pVITRO2-HLA-C,재장HLA-C cDNA경EcoRⅠ화Xho Ⅰ쌍매절,정향삽입단표체질립pVITRO2-HLA-G적다극륭위점2(mcs2)중,경PCR반응초사,재경쌍매절감정.결과한제성내절매화측서분석표명이성공구건료HLA-Cw*0103화HLA-G*0101적단표체질립pVITRO2-HLA-C화pVITRO2-HLA-G이급쌍표체질립pVITRO2-HLA-CG.결론본연구성공구건료진핵세포쌍순반자재체pVITRO2적쌍표체질립pVITRO2-HLA-CG,이급단표체질립pVITRO2-HLA-C화pVITRO2-HLA-G.
