中国胸心血管外科临床杂志
中國胸心血管外科臨床雜誌
중국흉심혈관외과림상잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL THORACIC AND CARDIOVASCULAR SURGERY
2006年
1期
28-31
,共4页
李凡东%雷印胜%邹承伟%范全心
李凡東%雷印勝%鄒承偉%範全心
리범동%뢰인성%추승위%범전심
RNA干扰%Kir2.1%质粒%生物起搏器
RNA榦擾%Kir2.1%質粒%生物起搏器
RNA간우%Kir2.1%질립%생물기박기
目的构建抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的真核表达质粒pEGFP6-kir2.1,观察对大鼠心肌细胞kir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表达情况及搏动频率的影响. 方法选择5个针对大鼠心肌细胞kir2.1基因的RNA干扰(RNA mterference)位点,设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-kir2.1.转染大鼠心肌细胞,并将其分为3组:实验组、阴性质粒对照组和空白对照组.转染后72h,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western-blotting)检测kir2.1mRNA和蛋白表达情况,并观察细胞搏动频率.结果转染后72h,实验组心肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P＜0.01),两对照组间比较差别无统计学意义;实验组搏动频率增加,并显著高于两对照组(P＜0.01),两对照组之间搏动频率差别无统计学意义.结论真核表达质粒pEGFP6-kir2.1能明显抑制大鼠kir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性.
目的構建抑製大鼠心肌細胞kir2.1基因的真覈錶達質粒pEGFP6-kir2.1,觀察對大鼠心肌細胞kir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白錶達情況及搏動頻率的影響. 方法選擇5箇針對大鼠心肌細胞kir2.1基因的RNA榦擾(RNA mterference)位點,設計閤成5對相應的寡覈苷痠鏈,形成雙鏈後依次將其連入帶有U6啟動子的載體,得到含5箇目的基因的重組質粒pEGFP6-kir2.1.轉染大鼠心肌細胞,併將其分為3組:實驗組、陰性質粒對照組和空白對照組.轉染後72h,用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白印跡法(Western-blotting)檢測kir2.1mRNA和蛋白錶達情況,併觀察細胞搏動頻率.結果轉染後72h,實驗組心肌細胞kir2.1 mRNA和蛋白錶達明顯低于兩對照組(P＜0.01),兩對照組間比較差彆無統計學意義;實驗組搏動頻率增加,併顯著高于兩對照組(P＜0.01),兩對照組之間搏動頻率差彆無統計學意義.結論真覈錶達質粒pEGFP6-kir2.1能明顯抑製大鼠kir2.1基因的錶達,提高大鼠心肌細胞的自律性.
목적구건억제대서심기세포kir2.1기인적진핵표체질립pEGFP6-kir2.1,관찰대대서심기세포kir2.1신사RNA(mRNA)、단백표체정황급박동빈솔적영향. 방법선택5개침대대서심기세포kir2.1기인적RNA간우(RNA mterference)위점,설계합성5대상응적과핵감산련,형성쌍련후의차장기련입대유U6계동자적재체,득도함5개목적기인적중조질립pEGFP6-kir2.1.전염대서심기세포,병장기분위3조:실험조、음성질립대조조화공백대조조.전염후72h,용역전록-취합매련반응(RT-PCR)화단백인적법(Western-blotting)검측kir2.1mRNA화단백표체정황,병관찰세포박동빈솔.결과전염후72h,실험조심기세포kir2.1 mRNA화단백표체명현저우량대조조(P＜0.01),량대조조간비교차별무통계학의의;실험조박동빈솔증가,병현저고우량대조조(P＜0.01),량대조조지간박동빈솔차별무통계학의의.결론진핵표체질립pEGFP6-kir2.1능명현억제대서kir2.1기인적표체,제고대서심기세포적자률성.
