吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2006年
2期
164-167,172
,共5页
胡薇%郝军元%艾永兴%张英波%张玉静
鬍薇%郝軍元%艾永興%張英波%張玉靜
호미%학군원%애영흥%장영파%장옥정
VEGF增强子%hTERT核心启动子%绿色荧光蛋白%表达
VEGF增彊子%hTERT覈心啟動子%綠色熒光蛋白%錶達
VEGF증강자%hTERT핵심계동자%록색형광단백%표체
以人肝癌细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增VEGF增强子和hTERT核心启动子序列,该序列与NCBI数据库参考序列相比,同源性达到99%以上.将VEGF增强子和hTERT核心启动子定向克隆到pBluescript Ⅱ SK载体中,构建VEGF增强子和hTERT核心启动子复合调控序列.酶切去除表达载体pECFP-C1的启动子CMV,并将所制备的复合调控序列连接到CMV位置,构建含该复合调控序列并可表达绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒,转染人肺癌细胞和正常人肝细胞.结果显示,在人肺癌细胞中观察到绿色荧光,而在人肝细胞中没有检测到.由此说明,具有肿瘤特异性的VEGF增强子和hTERT核心启动子复合转录调控序列可以驱动绿色荧光蛋白基因在人肺癌细胞中表达,但不能驱动该蛋白在正常人肝细胞中表达.
以人肝癌細胞基因組DNA為模闆,應用PCR方法擴增VEGF增彊子和hTERT覈心啟動子序列,該序列與NCBI數據庫參攷序列相比,同源性達到99%以上.將VEGF增彊子和hTERT覈心啟動子定嚮剋隆到pBluescript Ⅱ SK載體中,構建VEGF增彊子和hTERT覈心啟動子複閤調控序列.酶切去除錶達載體pECFP-C1的啟動子CMV,併將所製備的複閤調控序列連接到CMV位置,構建含該複閤調控序列併可錶達綠色熒光蛋白報告基因的重組質粒,轉染人肺癌細胞和正常人肝細胞.結果顯示,在人肺癌細胞中觀察到綠色熒光,而在人肝細胞中沒有檢測到.由此說明,具有腫瘤特異性的VEGF增彊子和hTERT覈心啟動子複閤轉錄調控序列可以驅動綠色熒光蛋白基因在人肺癌細胞中錶達,但不能驅動該蛋白在正常人肝細胞中錶達.
이인간암세포기인조DNA위모판,응용PCR방법확증VEGF증강자화hTERT핵심계동자서렬,해서렬여NCBI수거고삼고서렬상비,동원성체도99%이상.장VEGF증강자화hTERT핵심계동자정향극륭도pBluescript Ⅱ SK재체중,구건VEGF증강자화hTERT핵심계동자복합조공서렬.매절거제표체재체pECFP-C1적계동자CMV,병장소제비적복합조공서렬련접도CMV위치,구건함해복합조공서렬병가표체록색형광단백보고기인적중조질립,전염인폐암세포화정상인간세포.결과현시,재인폐암세포중관찰도록색형광,이재인간세포중몰유검측도.유차설명,구유종류특이성적VEGF증강자화hTERT핵심계동자복합전록조공서렬가이구동록색형광단백기인재인폐암세포중표체,단불능구동해단백재정상인간세포중표체.
