过程工程学报
過程工程學報
과정공정학보
The Chinese Journal of Process Engineering
2006年
6期
948-953
,共6页
D-海因酶%N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶%多顺反子%大肠杆菌%共表达
D-海因酶%N-氨甲酰基-D-氨基痠酰胺水解酶%多順反子%大腸桿菌%共錶達
D-해인매%N-안갑선기-D-안기산선알수해매%다순반자%대장간균%공표체
通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/His A质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E.coli Top10F'得到重组菌TaraCRH.实验证明,E.coli TaraCRH对外源蛋白的表达控制严紧,而加入阿拉伯糖诱导后可以成功表达两酶基因.诱导条件优化结果表明,诱导温度采用29℃,培养基中阿拉伯糖浓度0.05 g/L可达到最高酶活.进一步尝试采用玉米浆培养基代替LB培养基,在经过优化的玉米浆培养基中培养TaraCRH菌株,经阿拉伯糖诱导,海因酶和水解酶酶活分别达到3.52和4.21 U/mL.
通過PCR分彆擴增得到N-carbamoylase基因和上遊帶有RBS區的D-hydantoinase基因,併將其依次剋隆入pBAD/His A質粒中,得到呈多順反子結構的雙酶錶達質粒pBAD-CRH,轉化E.coli Top10F'得到重組菌TaraCRH.實驗證明,E.coli TaraCRH對外源蛋白的錶達控製嚴緊,而加入阿拉伯糖誘導後可以成功錶達兩酶基因.誘導條件優化結果錶明,誘導溫度採用29℃,培養基中阿拉伯糖濃度0.05 g/L可達到最高酶活.進一步嘗試採用玉米漿培養基代替LB培養基,在經過優化的玉米漿培養基中培養TaraCRH菌株,經阿拉伯糖誘導,海因酶和水解酶酶活分彆達到3.52和4.21 U/mL.
통과PCR분별확증득도N-carbamoylase기인화상유대유RBS구적D-hydantoinase기인,병장기의차극륭입pBAD/His A질립중,득도정다순반자결구적쌍매표체질립pBAD-CRH,전화E.coli Top10F'득도중조균TaraCRH.실험증명,E.coli TaraCRH대외원단백적표체공제엄긴,이가입아랍백당유도후가이성공표체량매기인.유도조건우화결과표명,유도온도채용29℃,배양기중아랍백당농도0.05 g/L가체도최고매활.진일보상시채용옥미장배양기대체LB배양기,재경과우화적옥미장배양기중배양TaraCRH균주,경아랍백당유도,해인매화수해매매활분별체도3.52화4.21 U/mL.
