微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
2期
252-256
,共5页
Red重组系统%Ⅰ型菌毛%fimH基因%生物学特性
Red重組繫統%Ⅰ型菌毛%fimH基因%生物學特性
Red중조계통%Ⅰ형균모%fimH기인%생물학특성
基于禽大肠杆菌Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因的已知序列,利用λ噬菌体的Red重组系统构建禽致病性大肠杆菌国内分离株A2(血清型O2:K89)Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因缺失突变株A2△fimH::Cat,在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20(温度敏感性)以去除上述缺失突变株中抗性基因标志,结合PCR扩增和测序结果,证明fimH基因缺失株.A2△fimH的正确构建.通过fimH基因互补试验使A2△fimH缺失突变株恢复了与野生株具有相同的凝集活性.红细胞和酵母细胞凝集试验结果表明,野生株呈现良好的凝集效果,并能被0.5%甘露糖完全抑制,而A2△fimH缺失突变株未呈现任何凝集现象.体外生长试验结果表明,在同样的培养条件下,A2△fimH缺失突变株生长周期的各个阶段都要稍慢于野生株.禽致病性大肠杆菌国内分离株Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因缺失突变株成功构建,为进一步深入研究禽大肠杆菌Ⅰ型菌毛与机体相互作用的分子机制,肠道外感染的致病机理及对国内禽大肠杆菌病的防控策略奠定了一定基础.
基于禽大腸桿菌Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因的已知序列,利用λ噬菌體的Red重組繫統構建禽緻病性大腸桿菌國內分離株A2(血清型O2:K89)Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因缺失突變株A2△fimH::Cat,在二次重組中利用攜帶能夠錶達FLP位點特異性重組酶的質粒pCP20(溫度敏感性)以去除上述缺失突變株中抗性基因標誌,結閤PCR擴增和測序結果,證明fimH基因缺失株.A2△fimH的正確構建.通過fimH基因互補試驗使A2△fimH缺失突變株恢複瞭與野生株具有相同的凝集活性.紅細胞和酵母細胞凝集試驗結果錶明,野生株呈現良好的凝集效果,併能被0.5%甘露糖完全抑製,而A2△fimH缺失突變株未呈現任何凝集現象.體外生長試驗結果錶明,在同樣的培養條件下,A2△fimH缺失突變株生長週期的各箇階段都要稍慢于野生株.禽緻病性大腸桿菌國內分離株Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因缺失突變株成功構建,為進一步深入研究禽大腸桿菌Ⅰ型菌毛與機體相互作用的分子機製,腸道外感染的緻病機理及對國內禽大腸桿菌病的防控策略奠定瞭一定基礎.
기우금대장간균Ⅰ형균모점부소fimH기인적이지서렬,이용λ서균체적Red중조계통구건금치병성대장간균국내분리주A2(혈청형O2:K89)Ⅰ형균모점부소fimH기인결실돌변주A2△fimH::Cat,재이차중조중이용휴대능구표체FLP위점특이성중조매적질립pCP20(온도민감성)이거제상술결실돌변주중항성기인표지,결합PCR확증화측서결과,증명fimH기인결실주.A2△fimH적정학구건.통과fimH기인호보시험사A2△fimH결실돌변주회복료여야생주구유상동적응집활성.홍세포화효모세포응집시험결과표명,야생주정현량호적응집효과,병능피0.5%감로당완전억제,이A2△fimH결실돌변주미정현임하응집현상.체외생장시험결과표명,재동양적배양조건하,A2△fimH결실돌변주생장주기적각개계단도요초만우야생주.금치병성대장간균국내분리주Ⅰ형균모점부소fimH기인결실돌변주성공구건,위진일보심입연구금대장간균Ⅰ형균모여궤체상호작용적분자궤제,장도외감염적치병궤리급대국내금대장간균병적방공책략전정료일정기출.
