华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
1期
69-73
,共5页
岳光芳%陈益填%刘颖%李万利%施振旦
嶽光芳%陳益填%劉穎%李萬利%施振旦
악광방%진익전%류영%리만리%시진단
鸡PRL融合蛋白%表达和纯化%复性%生物活性
鷄PRL融閤蛋白%錶達和純化%複性%生物活性
계PRL융합단백%표체화순화%복성%생물활성
将鸡催乳素(PRL)成熟肽cDNA片段插入原核表达载体pRSET A的Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ位点之间,构建重组表达质粒pPRL-SCAU.将此质粒转化大肠杆菌Escherichia coli菌株BL21(DE3),将重组菌在含氨苄青霉素的LB培养基中培养,再经IPTG诱导,可以诱导表达相对分子质量约为24 500的重组鸡PRL.经0.1 mmol/L IPTG诱导4 h后,表达量达到最高,占总菌体蛋白的30%左右.表达的重组鸡PRL含组氨酸标记,以包涵体形式存在,可经50%Ni-NTA树脂分离纯化,然后在透析复性后分离出可溶性部分.将此可溶性重组鸡PRL对3月龄的鸽子在左侧嗉囊处相同位置隔24 h 2次皮内注射,能够显著促进嗉囊上皮的增生.与天然鸡催乳素的增生效果相比,所表达的重组鸡PRL的生物学活性为天然催乳素的17%至25%.
將鷄催乳素(PRL)成熟肽cDNA片段插入原覈錶達載體pRSET A的Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ位點之間,構建重組錶達質粒pPRL-SCAU.將此質粒轉化大腸桿菌Escherichia coli菌株BL21(DE3),將重組菌在含氨芐青黴素的LB培養基中培養,再經IPTG誘導,可以誘導錶達相對分子質量約為24 500的重組鷄PRL.經0.1 mmol/L IPTG誘導4 h後,錶達量達到最高,佔總菌體蛋白的30%左右.錶達的重組鷄PRL含組氨痠標記,以包涵體形式存在,可經50%Ni-NTA樹脂分離純化,然後在透析複性後分離齣可溶性部分.將此可溶性重組鷄PRL對3月齡的鴿子在左側嗉囊處相同位置隔24 h 2次皮內註射,能夠顯著促進嗉囊上皮的增生.與天然鷄催乳素的增生效果相比,所錶達的重組鷄PRL的生物學活性為天然催乳素的17%至25%.
장계최유소(PRL)성숙태cDNA편단삽입원핵표체재체pRSET A적Nhe Ⅰ화Hind Ⅲ위점지간,구건중조표체질립pPRL-SCAU.장차질립전화대장간균Escherichia coli균주BL21(DE3),장중조균재함안변청매소적LB배양기중배양,재경IPTG유도,가이유도표체상대분자질량약위24 500적중조계PRL.경0.1 mmol/L IPTG유도4 h후,표체량체도최고,점총균체단백적30%좌우.표체적중조계PRL함조안산표기,이포함체형식존재,가경50%Ni-NTA수지분리순화,연후재투석복성후분리출가용성부분.장차가용성중조계PRL대3월령적합자재좌측소낭처상동위치격24 h 2차피내주사,능구현저촉진소낭상피적증생.여천연계최유소적증생효과상비,소표체적중조계PRL적생물학활성위천연최유소적17%지25%.
