CAJ | 학술논문

目的探索优化PCR及测序法检测DNA甲基化的实验条件,检测肺癌hsa-mir-34b(mir-34b)基因启动子DNA甲基化谱.方法肺癌细胞株A549 DNA进行亚硫酸盐处理后,设计引物扩增mir-34b基因启动子序列,使用普通PCR、巢式PCR和降落(Touchdown)PCR方法以及不同DNA聚合酶进行扩增,甲基化谱检测采用PCR直接测序和克隆后测序两种方法.结果降落 PCR与巢式PCR方法相结合优于普通PCR及单独的巢式PCR或降落 PCR.HotStart酶优于普通Taq酶及Ex Taq酶.直接PCR测序法的测序图普遍出现套峰难以判读,PCR产物克隆后测序可见清晰的测序峰,甲基化位点可明确判读,并可以结合测序克隆数目提高甲基化检测敏感度.结论对于重亚硫酸盐处理的DNA甲基化状态检测,推荐使用HotStart酶、降落 PCR与巢式PCR相结合、克隆测序法检测基因甲基化谱,序列图明确且敏感度高.
목적 탐색우화PCR급측서법검측DNA갑기화적실험조건,검측폐암hsa-mir-34b(mir-34b)기인계동자DNA갑기화보.방법 폐암세포주A549 DNA진행아류산염처리후,설계인물확증mir-34b기인계동자서렬,사용보통PCR、소식PCR화강락(Touchdown)PCR방법이급불동DNA취합매진행확증,갑기화보검측채용PCR직접측서화극륭후측서량충방법.결과 강락 PCR여소식PCR방법상결합우우보통PCR급단독적소식PCR혹강락 PCR.HotStart매우우보통Taq매급Ex Taq매.직접PCR측서법적측서도보편출현투봉난이판독,PCR산물극륭후측서가견청석적측서봉,갑기화위점가명학판독,병가이결합측서극륭수목제고갑기화검측민감도.결론 대우중아류산염처리적DNA갑기화상태검측,추천사용HotStart매、강락 PCR여소식PCR상결합、극륭측서법검측기인갑기화보,서렬도명학차민감도고.