中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2010年
3期
181-184,后插3
,共5页
王波%程萱%刘庆军%魏旭冉%尹玉静%高旭%杨晓%周虹
王波%程萱%劉慶軍%魏旭冉%尹玉靜%高旭%楊曉%週虹
왕파%정훤%류경군%위욱염%윤옥정%고욱%양효%주홍
HO-1%显微注射法%转基因小鼠
HO-1%顯微註射法%轉基因小鼠
HO-1%현미주사법%전기인소서
目的 建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型.方法 通过Sall/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,并移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠;用PCR对子代鼠尾DNA进行鉴定,并用Southem blot对结果做进一步验证;通过RT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测HO-1基因的表达.结果 表达盒回收片段正确;假孕鼠出生的17只子代小鼠共有3只阳性,均为雄性;RTPCR、免疫组化和Western blot结果表明,阳性小鼠体内的HO-1 mRNA与蛋白表达水平增高.结论 成功建立HO-1显性负性突变体G143H表达的转基因小鼠,该模型为研究HO-1在体内的作用机制奠定了基础.
目的 建立血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)顯性負性突變體G143H轉基因小鼠模型.方法 通過Sall/DraI酶切pCAGGHO-1G143H轉基因錶達載體,純化迴收HO-1G143H錶達盒片段;通過顯微註射把錶達目的基因的DNA片段導入FVB小鼠受精卵原覈,併移植給同期髮情的假孕受體母鼠,穫得子代小鼠;用PCR對子代鼠尾DNA進行鑒定,併用Southem blot對結果做進一步驗證;通過RT-PCR、免疫組化和Western blot方法檢測HO-1基因的錶達.結果 錶達盒迴收片段正確;假孕鼠齣生的17隻子代小鼠共有3隻暘性,均為雄性;RTPCR、免疫組化和Western blot結果錶明,暘性小鼠體內的HO-1 mRNA與蛋白錶達水平增高.結論 成功建立HO-1顯性負性突變體G143H錶達的轉基因小鼠,該模型為研究HO-1在體內的作用機製奠定瞭基礎.
목적 건립혈홍소가양매-1(heme oxygenase-1,HO-1)현성부성돌변체G143H전기인소서모형.방법 통과Sall/DraI매절pCAGGHO-1G143H전기인표체재체,순화회수HO-1G143H표체합편단;통과현미주사파표체목적기인적DNA편단도입FVB소서수정란원핵,병이식급동기발정적가잉수체모서,획득자대소서;용PCR대자대서미DNA진행감정,병용Southem blot대결과주진일보험증;통과RT-PCR、면역조화화Western blot방법검측HO-1기인적표체.결과 표체합회수편단정학;가잉서출생적17지자대소서공유3지양성,균위웅성;RTPCR、면역조화화Western blot결과표명,양성소서체내적HO-1 mRNA여단백표체수평증고.결론 성공건립HO-1현성부성돌변체G143H표체적전기인소서,해모형위연구HO-1재체내적작용궤제전정료기출.
