CAJ | 학술논문

目的探讨混合培养的人脐血间充质干细胞(MSCs)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的疗效.方法无菌条件下收集20份健康足月新生儿脐血,采用密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞,再通过贴壁细胞培养法培养出人脐血MSCs.当细胞传至第3代时,随机取培养的8份脐血MSCs(半量)为A组,8份脐血MSCs(半量)为B组,将A、B组剩余的半量脐血MSCs混合为C组,3组细胞密度均为1×106L-1.混合培养的第3代脐血MSCs用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD105的表达.选择P4代人脐血MSCs作为移植细胞,并经5-溴-2-尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)体外标记.7日龄SD大鼠45只制备HIBD模型,造模中死亡3只,余42只分为混合移植组(n=16)、单份移植组(n=16)和对照组(n=10).造模第3天,在立体定化条件下,移植组大鼠经左侧脑皮质注入人脐血 MSCs,对照组在相同部位注入相同体积的PBS.在细胞移植第7天,随机选择6只移植组大鼠处死取脑,采用免疫组织化学方法观察移植细胞在脑内的存活、迁移和分化情况.移植第1、7、14、21、28天采用改良神经功能损害评分(mNSS)对3组大鼠的神经功能进行评价.结果活细胞计数显示,C组细胞增殖较A组、B组快(Pa<0.05).移植组大鼠脑组织免疫组织化学检测发现移植细胞在脑内能够存活,并以移植点为中心向周围迁移;混合移植组BrdU阳性细胞数多于单份移植组(P<0.05).移植第1天,移植组大鼠mNSS低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);第7、14、21、28天,移植组大鼠mNSS低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第7、14、21、28天,混合移植组大鼠mNSS低于单份移植组,差异有统计学意义(P<0.05).结论混合培养的人脐血MSCs脑移植对HIBD新生大鼠具有较好的治疗作用.
목적 탐토혼합배양적인제혈간충질간세포(MSCs)대결양결혈성뇌손상(HIBD)신생대서적료효.방법 무균조건하수집20빈건강족월신생인제혈,채용밀도제도리심법분리출제혈단개핵세포,재통과첩벽세포배양법배양출인제혈MSCs.당세포전지제3대시,수궤취배양적8빈제혈MSCs(반량)위A조,8빈제혈MSCs(반량)위B조,장A、B조잉여적반량제혈MSCs혼합위C조,3조세포밀도균위1×106L-1.혼합배양적제3대제혈MSCs용류식세포의검측세포표면항원CD29、CD34、CD44、CD105적표체.선택P4대인제혈MSCs작위이식세포,병경5-추-2-뇨밀정탈양핵감(BrdU)체외표기.7일령SD대서45지제비HIBD모형,조모중사망3지,여42지분위혼합이식조(n=16)、단빈이식조(n=16)화대조조(n=10).조모제3천,재입체정화조건하,이식조대서경좌측뇌피질주입인제혈 MSCs,대조조재상동부위주입상동체적적PBS.재세포이식제7천,수궤선택6지이식조대서처사취뇌,채용면역조직화학방법관찰이식세포재뇌내적존활、천이화분화정황.이식제1、7、14、21、28천채용개량신경공능손해평분(mNSS)대3조대서적신경공능진행평개.결과 활세포계수현시,C조세포증식교A조、B조쾌(Pa<0.05).이식조대서뇌조직면역조직화학검측발현이식세포재뇌내능구존활,병이이식점위중심향주위천이;혼합이식조BrdU양성세포수다우단빈이식조(P<0.05).이식제1천,이식조대서mNSS저우대조조,단차이무통계학의의(P>0.05);제7、14、21、28천,이식조대서mNSS저우대조조,차이유통계학의의(P<0.05);제7、14、21、28천,혼합이식조대서mNSS저우단빈이식조,차이유통계학의의(P<0.05).결론 혼합배양적인제혈MSCs뇌이식대HIBD신생대서구유교호적치료작용.