CAJ | 학술논문

在部分朊病毒病(prion diseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prion protein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX-2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GST-tau.利用GST pull-down及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23-231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GST pull-down和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.
재부분원병독병(prion diseases)중,고도린산화적미관상관단백tau여원단백(prion protein,PrP)발생공정위,tau단백가능재원병독병적병리궤제중유중요작용.본실이경증명이자가이발생분자간상호작용,본문진일보분석료tau단백여prion적체외상호작용급작용위점.이용RT-PCR방법종인원세포계SH-SY5Y cDNA중확증출미관상관단백tau전장cDNA서렬,극륭지질립pGEX-2T재체,재대장간균중유도표체융합단백GST-tau.이용GST pull-down급면역공침정방법검측전장tau단백여PrP23-231적분자간상호작용.진일보표체tau단백적각충결실돌변체,학정tau단백여PrP단백적상호작용위점.결과표명,소표체적전장tau단백급각충결실돌변체균위가용성단백,Western인적결과현시,각충단백균능흔호적피tau단백단항식별.GST pull-down화면역공침정실험균현시,원핵표체적전장tau단백가여전장적PrP단백재체외발생상호작용,병학정상호작용위점위우tau단백적N단서렬급중단적중복구.상술결과위연구tau단백여PrP적상호작용재원병독병적발병궤제중적의의제공료일정적이론기출.