结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定
결핵간균Esat6여hGM-CSF쌍순반자표체재체적구건급감정
  • 万方数据
    广东医学 엄동의학
    GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
    2007年 5期 697-699 ,共3页

    李君武%黄泽棋%姚翠婵%林绍强%周曙光%李晓栋%宋东%黄清华%王珊

    리군무%황택기%요취선%림소강%주서광%리효동%송동%황청화%왕산

    结核分支杆菌%Esat6%hGM-CSF%双顺反子%DNA疫苗 結覈分支桿菌%Esat6%hGM-CSF%雙順反子%DNA疫苗
    결핵분지간균%Esat6%hGM-CSF%쌍순반자%DNA역묘
    目的 从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定.方法 以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒.然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG.结果 通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符.测序结果与报道一致.结论 成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.
    목적 종질립pVAE중극륭목적기인Esat6,여hGM-CSF일기구건쌍순반자표체재체pIEG,병진행감정.방법 이질립pVAE위모판확증출Esat6기인,여pIRES적MCS A진행중조,구건pIEsat6중조질립.연후재이pORF-hGM-CSF위모판확증출hGM-CSF기인,여pIRES재체적MCS B진행중조,구건pIGM중조질립,상술량중조질립경PCR、한제성내절매도보급DNA서렬측정분석등다충방법진행감정후,재통과매절、련접파hGM-CSF구건우pIEsat6질립중,형성쌍순반자진핵표체재체pIEG.결과 통과PCR가극륭득도상응대소적산물,매절감정소절하적량편단대소약위0.29 kb화0.47 kb,여예계상부.측서결과여보도일치.결론 성공구건결핵간균Esat6기인여hGM-CSF쌍순반자진핵표체재체,위진일보연구기결핵융합DNA역묘급기전염DC역묘원형적면역보호효과전정료기출.
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