分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2008年
3期
419-424
,共6页
毛建军%曾洪梅%杨秀芬%袁京京%邱德文
毛建軍%曾洪梅%楊秀芬%袁京京%邱德文
모건군%증홍매%양수분%원경경%구덕문
烟草%蛋白激发子%植物表达载体%遗传转化
煙草%蛋白激髮子%植物錶達載體%遺傳轉化
연초%단백격발자%식물표체재체%유전전화
设计含Mlu Ⅰ酶切位点的接头,将其连接入经Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后的质粒pCAMBIA2300-U-bi-Ocs,得到pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs.设计含有Kan Ⅰ和Mlu Ⅰ酶位点的引物,以稻瘟菌基因组DNA为模板扩增得到peraG1序列.将其连接入pMD18-T得到pMD18-T-pemG1.最后,用Kpn Ⅰ和Mlu Ⅰ从pMD18-T-pemG1切下peraG1基因片段,将其连接入pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs的Kpn Ⅰ-Mlu Ⅰ酶切位点,构建成稻瘟菌蛋白激发子基因peraG1的植物表达载体体pCAMBIA2300-Ubi-pemG1-Ocs.用冻融法将pCAMBIA2300-Ubi-peraG1-Ocs导入根癌农杆菌菌株AGL-1,再通过根癌农杆菌介导转化获得了转基因烟草株系.用PCR,Northern和Western杂交验证了pemG1基因在受体烟草基因组中的整合,转录和表达.此研究为下一步通过稻瘟菌蛋白激发子基因pemG1的表达来提高转基因烟草的抗病性打下了基础.
設計含Mlu Ⅰ酶切位點的接頭,將其連接入經Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切後的質粒pCAMBIA2300-U-bi-Ocs,得到pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs.設計含有Kan Ⅰ和Mlu Ⅰ酶位點的引物,以稻瘟菌基因組DNA為模闆擴增得到peraG1序列.將其連接入pMD18-T得到pMD18-T-pemG1.最後,用Kpn Ⅰ和Mlu Ⅰ從pMD18-T-pemG1切下peraG1基因片段,將其連接入pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs的Kpn Ⅰ-Mlu Ⅰ酶切位點,構建成稻瘟菌蛋白激髮子基因peraG1的植物錶達載體體pCAMBIA2300-Ubi-pemG1-Ocs.用凍融法將pCAMBIA2300-Ubi-peraG1-Ocs導入根癌農桿菌菌株AGL-1,再通過根癌農桿菌介導轉化穫得瞭轉基因煙草株繫.用PCR,Northern和Western雜交驗證瞭pemG1基因在受體煙草基因組中的整閤,轉錄和錶達.此研究為下一步通過稻瘟菌蛋白激髮子基因pemG1的錶達來提高轉基因煙草的抗病性打下瞭基礎.
설계함Mlu Ⅰ매절위점적접두,장기련접입경Kpn Ⅰ화BamH Ⅰ매절후적질립pCAMBIA2300-U-bi-Ocs,득도pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs.설계함유Kan Ⅰ화Mlu Ⅰ매위점적인물,이도온균기인조DNA위모판확증득도peraG1서렬.장기련접입pMD18-T득도pMD18-T-pemG1.최후,용Kpn Ⅰ화Mlu Ⅰ종pMD18-T-pemG1절하peraG1기인편단,장기련접입pCAMBIA2300-Ubi-adaptor-Ocs적Kpn Ⅰ-Mlu Ⅰ매절위점,구건성도온균단백격발자기인peraG1적식물표체재체체pCAMBIA2300-Ubi-pemG1-Ocs.용동융법장pCAMBIA2300-Ubi-peraG1-Ocs도입근암농간균균주AGL-1,재통과근암농간균개도전화획득료전기인연초주계.용PCR,Northern화Western잡교험증료pemG1기인재수체연초기인조중적정합,전록화표체.차연구위하일보통과도온균단백격발자기인pemG1적표체래제고전기인연초적항병성타하료기출.
