吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2008年
3期
348-351,355
,共5页
杜眉%丁壮%徐明%宋子运%毕玉海%尹仁福
杜眉%丁壯%徐明%宋子運%畢玉海%尹仁福
두미%정장%서명%송자운%필옥해%윤인복
鹅源副黏病毒%F基因%定点突变%表达
鵝源副黏病毒%F基因%定點突變%錶達
아원부점병독%F기인%정점돌변%표체
根据已发表的鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株F基因序列设计2对引物,引物中含有突变位点,分3次扩增F基因片段,从而得到目的基因片段,再利用酶切位点将基因片段与转座载体pFastBac1连接,获得重组质粒,命名为pFastBac1-F',从而使改造后的F'基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117.并将pFastBac1-F',进行测序鉴定后转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F'转染Sf9昆虫细胞,并进行表达检测.结果,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测获得蛋白特异条带,相当分子量约63kD.
根據已髮錶的鵝源副黏病毒(GPMV)NA-1株F基因序列設計2對引物,引物中含有突變位點,分3次擴增F基因片段,從而得到目的基因片段,再利用酶切位點將基因片段與轉座載體pFastBac1連接,穫得重組質粒,命名為pFastBac1-F',從而使改造後的F'基因編碼的氨基痠裂解位點為112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117.併將pFastBac1-F',進行測序鑒定後轉化到DH10Bac宿主菌,將目的基因定嚮插入到Bacmid質粒中,經篩選穫得的重組Bacmid F'轉染Sf9昆蟲細胞,併進行錶達檢測.結果,錶達產物經SDS-PAGE和Western-blot檢測穫得蛋白特異條帶,相噹分子量約63kD.
근거이발표적아원부점병독(GPMV)NA-1주F기인서렬설계2대인물,인물중함유돌변위점,분3차확증F기인편단,종이득도목적기인편단,재이용매절위점장기인편단여전좌재체pFastBac1련접,획득중조질립,명명위pFastBac1-F',종이사개조후적F'기인편마적안기산렬해위점위112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117.병장pFastBac1-F',진행측서감정후전화도DH10Bac숙주균,장목적기인정향삽입도Bacmid질립중,경사선획득적중조Bacmid F'전염Sf9곤충세포,병진행표체검측.결과,표체산물경SDS-PAGE화Western-blot검측획득단백특이조대,상당분자량약63kD.
