中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2009年
8期
1285-1292
,共8页
张培影%韩从辉%郝林%贺厚光%董秉政%范涛%贡震%胡建鹏
張培影%韓從輝%郝林%賀厚光%董秉政%範濤%貢震%鬍建鵬
장배영%한종휘%학림%하후광%동병정%범도%공진%호건붕
药物载体%溶瘤病毒%腺病毒科%肠毒素类%肿瘤
藥物載體%溶瘤病毒%腺病毒科%腸毒素類%腫瘤
약물재체%용류병독%선병독과%장독소류%종류
目的 构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的条件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA.方法 将已构建好的携带SEA基因的非增殖溶瘤腺病毒载体质粒pDC318-SEA经SpeⅠ和SalⅠ双酶切后,将酶切下的超抗原SEA基因片段连接到同样经SpeⅠ和SalⅠ双酶切后的增殖型溶瘤腺病毒穿梭质粒pENTR12中,将鉴定正确的携带SEA基因增殖溶瘤腺病毒载体命名为pENTR12-SEA.增殖溶瘤腺病毒载体pENTR12-SEA与病毒骨架质粒pPE3-ccdB重组,通过Lipofectamine 2000共转染HEK293细胞,经同源重组产生重组腺病毒pPE3-SEA.结果 应用PCR验证、双酶切分析、序列测定表明,成功构建了携带SEA基因增殖型溶瘤腺病毒载体pENTR12-SEA,通过同源重组成功获得携带超抗原SEA基因片段的pPE3-SEA增殖型溶瘤腺病毒,且病毒滴度为2.5×1010 pfu/ml. 结论成功构建了表达超抗原SEA基因的条件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA,为以后进一步研究该病毒对肿瘤靶向治疗的作用提供了实验基础.
目的 構建錶達超抗原金黃色葡萄毬菌腸毒素A(SEA)基因的條件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA.方法 將已構建好的攜帶SEA基因的非增殖溶瘤腺病毒載體質粒pDC318-SEA經SpeⅠ和SalⅠ雙酶切後,將酶切下的超抗原SEA基因片段連接到同樣經SpeⅠ和SalⅠ雙酶切後的增殖型溶瘤腺病毒穿梭質粒pENTR12中,將鑒定正確的攜帶SEA基因增殖溶瘤腺病毒載體命名為pENTR12-SEA.增殖溶瘤腺病毒載體pENTR12-SEA與病毒骨架質粒pPE3-ccdB重組,通過Lipofectamine 2000共轉染HEK293細胞,經同源重組產生重組腺病毒pPE3-SEA.結果 應用PCR驗證、雙酶切分析、序列測定錶明,成功構建瞭攜帶SEA基因增殖型溶瘤腺病毒載體pENTR12-SEA,通過同源重組成功穫得攜帶超抗原SEA基因片段的pPE3-SEA增殖型溶瘤腺病毒,且病毒滴度為2.5×1010 pfu/ml. 結論成功構建瞭錶達超抗原SEA基因的條件增殖型溶瘤腺病毒pPE3-SEA,為以後進一步研究該病毒對腫瘤靶嚮治療的作用提供瞭實驗基礎.
목적 구건표체초항원금황색포도구균장독소A(SEA)기인적조건증식형용류선병독pPE3-SEA.방법 장이구건호적휴대SEA기인적비증식용류선병독재체질립pDC318-SEA경SpeⅠ화SalⅠ쌍매절후,장매절하적초항원SEA기인편단련접도동양경SpeⅠ화SalⅠ쌍매절후적증식형용류선병독천사질립pENTR12중,장감정정학적휴대SEA기인증식용류선병독재체명명위pENTR12-SEA.증식용류선병독재체pENTR12-SEA여병독골가질립pPE3-ccdB중조,통과Lipofectamine 2000공전염HEK293세포,경동원중조산생중조선병독pPE3-SEA.결과 응용PCR험증、쌍매절분석、서렬측정표명,성공구건료휴대SEA기인증식형용류선병독재체pENTR12-SEA,통과동원중조성공획득휴대초항원SEA기인편단적pPE3-SEA증식형용류선병독,차병독적도위2.5×1010 pfu/ml. 결론성공구건료표체초항원SEA기인적조건증식형용류선병독pPE3-SEA,위이후진일보연구해병독대종류파향치료적작용제공료실험기출.
